Optimal fiksering, behandling og indlejring er kritiske første skridt for at muliggøre den histologiske undersøgelse af vævsmorfologi og biomarkørlokalisering i vævsprøver. Omhyggelighed i disse indledende faser fører til farvning, billeddannelse og molekylær analyse af højere kvalitet i senere faser af histologiarbejdsgangen. Denne artikel er en kort oversigt over almindelige fiksering, behandling og indlejring af FFPE-væv fra gnavere.
Fiksering
Optimal fiksering af histologiske prøver er afgørende for bevarelsen af vævsarkitekturen, herunder celler, cellulære komponenter (dvs. cytoplasma, kerner, organeller), ekstracellulært materiale og molekylære komponenter (dvs. proteiner, DNA, mRNA). Der findes mange forskellige fixeringsmidler, og de har hver især fordele og ulemper afhængigt af anvendelsen. Du kan læse mere om forskellige vævsfikseringsmidler ved at bruge Googles søgning Talk to Books.
Det mest almindelige fikseringsmiddel, der anvendes i rutinemæssig diagnostisk patologi, er 10% Neutral Buffered Formalin (10% NBF). Dette fiksationsmiddel giver typisk en god vævsbevaring; der skal dog tages hensyn til faktorer som f.eks. fiksationstid, temperatur, pH-værdi og prøvens tykkelse for at opnå de bedste resultater.
Prøver: Vævet skal trimmes til en tykkelse på 3-5 mm, inden det anbringes i fixeringsmiddel.
Volumen: Der skal anvendes mindst en del væv til 20 dele fixeringsmiddel. Fixeringsmidlet skal være fri for blod.
Tid: Vævene fikseres normalt i 24 timer ved stuetemperatur, inden de behandles i paraffinvoks.
Lagring: Vævene kan opbevares i 70 % ethanol efter fiksering. Dette anbefales ikke for hjerne eller andre neurologiske prøver.
Væv som øjne, lunger, tarme og knogler kan kræve andre fixeringsmidler og/eller særlig behandling, kontakt venligst Reveal Biosciences for yderligere oplysninger.
Vævsbehandling
Fixerede væv behandles typisk til paraffinvoks ved hjælp af automatiserede vævsprocessorer. Automatiseret vævsbehandling indebærer nedsænkning af prøver i en defineret serie af opløsninger, herunder alkoholer, xylen og paraffinvoks. Hvert trin kan tilpasses ved at styre tid, temperatur og tryk/vakuum (P/V) for at sikre, at opløsningen trænger godt ind i prøverne. Vores histologer har udviklet en række vævsbehandlingsskemaer, der er specielt designet til forskellige vævstyper.
Indlejring
Indlejring af høj kvalitet indebærer en konsekvent orientering af alle prøver af samme vævstype. Prøver kan efter anmodning indlejres i blokke i en række forskellige orienteringer; vi følger dog typisk retningslinjerne for indlejring af væv fra gnavere i henhold til Registry of Industrial Toxicology Animal (RITA) og North American Control Animal Database (NACAD). Sørg venligst for at angive på forhånd, hvis din undersøgelse kræver en anden vævsindlejringsorientering, og vi vil med glæde imødekomme din anmodning.
Sammenfattende er optimal fiksering, behandling og indlejring kritiske første skridt for at muliggøre undersøgelse af vævsmorfologi og biomarkørlokalisering i vævsprøver. Kontakt os venligst med eventuelle spørgsmål eller for at drøfte dine undersøgelsesbehov, og vi vil med glæde hjælpe.