Formålet med forsøget er at observere amylaseenzym i forskellige miljøer og at detektere hvert miljø ved at hjælpe med farveændringer. Enzymer er biologiske molekyler, der katalyserer mange forskellige kemiske reaktioner. Med få undtagelser er alle enzymer proteiner, og hvert enzym er specifikt for en bestemt kemisk reaktion. Enzymer skal opretholde en bestemt tredimensionel struktur for at kunne fungere korrekt. Hvis et enzyms struktur ændres (ved varme eller skrappe kemikalier), kan det være, at det slet ikke fungerer. Denne nedbrydning (denaturering) af et enzyms struktur kan være dødelig
Hvis du har brug for hjælp til at skrive dit essay, er vores professionelle essayskrivningsservice her for at hjælpe!
Få mere at vide
Amylaseenzym
Amylase, som almindeligvis findes i spyt og spirende frø. Det katalyserer nedbrydningen af stivelse. Når amylase reagerer med stivelse, skærer det disaccharidet maltose (to glukosemolekyler, der er bundet sammen) fra. Efterhånden som reaktionen skrider frem, vil der være mindre stivelse til stede, og der vil være mere sukker (maltose) til stede. amylasens aktivitet kan observeres ved hjælp af jod. fordi jod reagerer med stivelse og danner en mørkebrun/violet farve. Efterhånden som amylase nedbryder stivelse, vil der være mindre og mindre stivelse til stede, og farven på opløsningen (hvis der er tilsat jod) vil blive lysere og lysere. Farveændringen blev observeret ved hjælp af spotplader som illustreret på nedenstående diagram.
Amylaseaktiviteten blev observeret under fire forskellige behandlinger:
Effekt af temperatur
Effekt af pH
Effekt af substratkoncentration
Effekt af enzymkoncentration
Effekten af temperatur
Amylase er et vigtigt metabolisk enzym. Dets funktion er at katalysere hydrolysen af stivelse til glukose. Ved høje temperaturer bliver amylase denatureret, og denatureret amylase katalyserer ikke længere hydrolysen af stivelse til glukose.
FEKTEN AF pH:
Hvad er den optimale pH-værdi for amylase på baggrund af disse resultater? Er denne optimale pH-værdi sur, basisk/alkalisk eller neutral? Hvorfor falder aktiviteten, når pH-værdien er for lav eller for høj?
APPARATUS
-Stivelse
-Amylase Enzym
-KH2P04
-Na2HP04
-HCI
-Varmeapparat
-Beholder
-Falcon tube
-Spektrofotometer
-Iod
FORSØGELSE
1.0,27 g KH2P04 bufferopløsning PH 5 blev tilberedt med 20 ml
2. 0,27 g KH2P04 PH6 blev tilberedt med 20 ml
3. 0,0.27g KH2P04 PH7 blev tilberedt med 100ml
4.0.282g Na2HPO4 PH8 blev tilberedt med 20ml
5.0.282g Na2HP04 PH9 blev tilberedt med 20ml
6.20g Stivelse blev også tilberedt med 50ml koldt vand
7. For at teste amylaseaktivitet med PH forskel blev 5ml stivelse ,5ml buffer(PH5,6,7,8,9 bruges hver) og 1ml amylase blandet sammen.
8.10min senere blev 0.5ml forberedt prøve lagt i 5ml HCI.
9.Ved 620nm blev resultaterne målt på spektrofotometer.
10. Anden del temperatureffekt,5ml stivelse,5ml PH7 buffer og 1ml amylase blev blandet.
11.Den forberedte prøve blev sat i forskellige temperaturer 30,50,70 og 90C.
12.10 min senere blev 5ml HCI sat i 0,5 ml forberedt prøve.
13.2-3 min senere blev 5ml jod tilsat i 0,5ml ny prøve
14.Absorbans af hver blev målt på spektrofotometer.
OBSERVATIONER
I dette forsøg har vi forsøgt at skabe forskellige miljøer for at undersøge amylaseenzymaktivitet.Vi fremstillede derfor forskellige medier med forskellige pH-værdier.K2.Vi fik en graf af vores resultater.Den ene er en graf, der vedrører amylaseaktivitet ved forskellige PH-værdier.Den anden vedrører amylaseaktivitet ved forskellige temperaturer ved konstant PH-værdi.Med K2HPO4 blev der fremstillet PH 5,6 og 7 og med Na2PO4 8 og 9.Hver præparationsprocedure blev anvendt.5ml stivelse, 5 ml buffer, 1 ml amylase blev tilsat hinanden og derefter ventet 10 min.Efter 10 min blev der tilsat 5 ml HCI til 0,5 ml prøveblanding.På samme måde blev blandingen til temperaturobservation fremstillet ved pH 7.Og der blev tilsat jod til sidst i proceduren. Absorbansresultater blev taget fra spektrofotometri.Denne måling var ved 620nm.
pH bufferprøve med amylase
I henhold til resultaterne,
Den mindste kan tænkes at være den bedste.Hvor meget enzym der bruges er mere væsentligt punkt.Hvis den er mindre, betyder det, at stivelse ikke kan udnyttes tilstrækkeligt.En høj stivelsesmængde betyder, at kompleksmængden også er høj.Den modsatte viser den bedste amylaseaktivitet ved den mindste koncentration.Farven er mere lys, og en mindre absorbans kan betragtes som den bedste amylaseaktivitet.
Temperaturprøve med amylase
Ved 30C er farven let orange.
Ved 50C er farven ekstra lys som jodfarve.
Ved 70C er farven let lilla.
Ved 90C er farven mere lilla end ved 30C som orange-lilla.Ved konstant PH er den lille koncentration ved 50C lille absorbans dannet af et lille kompleks.Det betyder, at mængden af stivelse også blev reduceret.Den bedste aktivitet er 50C ved konstant PH.
Vores akademiske eksperter er klar og venter på at hjælpe dig med ethvert skriveprojekt, du måtte have. Fra enkle essayplaner til komplette afhandlinger kan du garantere, at vi har en service, der passer perfekt til dine behov.
Se vores tjenester
RESULTATER
Vores mål er at være relateret til aktivitet af amylase.For at påvise det, har vi fremstillet forskellige PH fra KHP04 og Na2HP04 ved at tilsætte syre eller base. Efter forberedelse af buffer måler vi absorbansen ved spektrofotometri.Ved forskellige PH-værdier giver absorbansen også forskellige koncentrationer.Hvis koncentrationen af amylaseenzym med prøven er lille, betyder det, at enzymet er mere lille, så enzymaktiviteten er den bedste.Ved forskellige PH-værdier er den mindste koncentration ved PH 7.Derefter gennemførte vi anden del af forsøget ved at bruge PH 7.Valget af PH7 er relateret til observationen af den bedste amylaseaktivitet i første del. Ved PH7 tog vi en prøve med amylaseenzymkoncentration ved forskellige PH’er.Den mindste koncentration er ved 50C i anden del.Koncentrationen er 0,006.Farven er mere lys som jodfarve.Stivelse anvendes sammen med amylase, og derfor er den komplekse farve også mere lys.Amylaseenzymaktiviteten er bedst ved 50C.Denne måling er foretaget ved 620nm.
DISKUSSION OG KONKLUSION
Hvorfor måles der ved 620nm? Hvorfor anvendes HCI til præparation ? Hvad betyder lys farve?Hvordan påvirker mere varme rxn? Under forsøget ønsker vi at skelne formålet med forsøget ved at svare på disse spørgsmål.I dette forsøg har vi relateret til effekten af forskellige buffere og temperaturer.Vi har fremstillet buffere med forskellige PH.KH2P04 blev fremstillet til PH 5,6,7og Na2HP04 til PH 8og 9.I første del blev der ved konstant temperatur (stuetemperatur) målt en prøve med amylasekoncentration.Ved PH 7 målte vi den mindste koncentration.Lille koncentration betyder mindre kompleks mindre stivelse og enzym er brugt enzymaktivitet er høj.Vores resultat fra måling ved PH 7 er 0,026.Som anden del blev konstant PH, temperatur ændret og derefter observeret effekten af det.Ved 50 C blev den mindste absorbans (0,0060) fundet, og farven var ekstra lys. det betyder, at der er mere mindre kompleks. i dette forsøg anvendes jod til at detektere stivelsesmolekyler ved at observere farveændringen. jod og stivelse blev kombineret og dannede derefter kompleks. et andet punkt er, hvorfor HCI anvendes.Syren stopper den enzymatiske reaktion, og jod reagerer med stivelse for at producere blå farve. enzymets aktivitet er også vigtig. det kan bruges til denatureringsdetektion. stivelse reagerer med jod, som er gult, for at danne blå forbindelse Amax=620nm. intensiteten af den blå farve kan kvantificeres spektrofotometrisk ved at måle dens absorbans ved 620nm.