Agarose

Agarosepulver und vorgefertigte Gele

Bio-Rad bietet eine Vielzahl von Agarosepulvern und vorgefertigten Agarosegelen an, um all Ihre Bedürfnisse für die DNA- und RNA-Elektrophorese zu erfüllen, einschließlich Pulsfeld-Gelelektrophorese und Spezialanwendungen wie IEP und IEF. Bei den Pulvern handelt es sich um zertifizierte, auf genetische Qualität geprüfte DNA-Agarose. Unsere vorgefertigten Gele sind sowohl in TBE- als auch in TAE-Puffer, mit oder ohne Ethidiumbromid erhältlich.

Agarosetypen und Verwendung in der Elektrophorese

Alle Bio-Rad Agaroseprodukte sind garantiert frei von Inhibitoren, DNasen und RNasen. Es gibt eine Reihe von Agarose-Typen, die für verschiedene Anwendungen optimiert wurden.

Molekularbiologische Agarose: Dies ist eine Allzweck-Agarose, die eine hohe Ausschlussgrenze hat. Dieser Agarosetyp hat eine hohe Gelfestigkeit und ist bei niedrigen Prozentsätzen leicht zu handhaben. Molekularbiologische Agarose ist GQT (genetisch qualitätsgeprüft) und damit ideal für präparative Gele und die Rückgewinnung von DNA. Die analytische Trennung beträgt >1.000 Basenpaare (bp).

Agarose mit niedrigem Schmelzpunkt: Niedrigschmelzende Agarose wird hauptsächlich für die präparative Elektrophorese verwendet. Sie ist ideal für In-Gel-Anwendungen wie Ligation, PCR, Restriktionsenzymverdau, Transformation und Sequenzierung. Weitere Anwendungen sind die gepulste Feldelektrophorese von Megabase-DNA und die Einbettung von Chromosomen. Diese Agarose hat eine Geliertemperatur von 26°C und ein hohes Auflösungsvermögen von >1.000 kb.

Niedrigschmelzende Agarose wird auch verwendet, um immobilisierte pH-Gradientenstreifen (IPG) für die isoelektrische Fokussierung, die zweite Dimension der 2-D SDS-PAGE, zu sichern. Diese Agarose enthält Bromphenolblau zur Überwachung der Elektrophorese.

PCR-Agarose: Diese hochfeste Agarose bildet Gele, die leicht zu handhaben sind und auch bei hohen Gelanteilen flexibel bleiben, wodurch das Risiko von Rissen oder Brüchen verringert wird. Die Geliertemperatur beträgt 40°C. Diese Agarose hat hervorragende Siebeigenschaften und die höchste Gelfestigkeit aller Agarosen.

PCR-Agarose mit niedrigem Schmelzpunkt hat eine hohe Siebleistung. Sie ist ideal für die präparative Elektrophorese und In-Gel-Anwendungen wie Restriktionsenzymverdauung, Ligation und Transformation. PCR-Agarosen werden für DNA-Fragmente <1.000 bp empfohlen.

Low range ultra agarose: Diese Agarose ermöglicht die Auflösung von Primern und kleinen PCR-Produkten bei niedrigeren Konzentrationen als Standard-Agarose, wodurch die Verwendung von Polyacrylamid vermieden wird. Ein 3%iges Gel löst eine 10 bp-Leiter deutlich auf. Die analytische Trennung beträgt 20-800 bp.

Megabase-Agarose: Diese Agarose hat eine sehr hohe Gelstärke, eine hohe elektrophoretische Mobilität und eine hohe Ausschlussgrenze. Megabase-Agarose ist die beste Wahl für geklammerte homogene elektrische Feld- (CHEF) und Feld-Inversions-Gelelektrophorese (FIGE) Anwendungen. Die Gele sind auch bei Konzentrationen von nur 0,3 % leicht zu handhaben und ermöglichen kürzere Laufzeiten. Die geringe Hintergrundfärbung ermöglicht auch eine hervorragende Darstellung von DNA mit hohem Molekulargewicht. Der Trennbereich liegt zwischen 1 kb und 5 Mb.

Gepulste Feldagarose: Die Gelelektrophorese mit gepulstem Feld (PFGE) wird zur Auftrennung großer DNA-Fragmente verwendet. Obwohl Gele, die mit dieser Agarose gegossen werden, längere PFGE-Laufzeiten haben als mit Megabase-Agarose, sind die Laufbedingungen für diese Agarose ein voreingestelltes, auswählbares Protokoll für den Auto-Algorithmus des CHEF Mapper® XA-Systems. Der Trennbereich beträgt 1 kb bis 2 Mb.

Agarose für IEP und IEF: Agarosen sind für die Immunelektrophorese (IEP) und die isoelektrische Fokussierung (IEF) erhältlich. Sie können für die Bestimmung des relativen Molekulargewichts (Mr) verwendet werden. Die Agarose für die IEF weist keine nachweisbare Elektroendosmose auf.

Vorgegossene Agarosegele

Vorgegossene Agarosegele haben neben der Schnelligkeit und Reproduzierbarkeit mehrere Vorteile. Die verschließbare Schale verhindert, dass sich die Agarosegele während des Beladens und zu Beginn eines Laufs bewegen, was zu Probenverlust, ungleichmäßiger Beladung und geringerer Bandenschärfe führen kann. Das UV-transparente Tablett hat fluoreszierende, nummerierte Vertiefungen, die bei vielen Proben die Übersicht über die Beladungsmuster erleichtern, sowie ein fluoreszierendes Lineal an einer Seite zur Messung der Migration.

Eine große Auswahl an Gelen, 1 und 3% Agarose, TBE und TAE, mit und ohne Ethidiumbromid, ist erhältlich. Die Konfiguration der Vertiefungen entspricht den Anforderungen von der Vorbereitung bis zum Screening einer großen Anzahl von Proben (bis zu vier Reihen von Vertiefungen). Dank ihrer Einheitlichkeit lassen sich vorgefertigte Agarosegele leicht mit einer Mehrkanalpipette beladen.

Vorgefertigte Agarosegele bieten eine hervorragende Trennung und Auflösung von DNA und sind mit den meisten horizontalen Unterwasserelektrophorese-Systemen kompatibel.

Weitere Informationen über Agarose

Agarose ist ein lineares Polysaccharid aus sich wiederholenden Agarobiose-Einheiten, das aus gekochten Rotalgen gewonnen wird. Ihre neutrale Ladung, die niedrige Geliertemperatur und die Bildung stabiler Gele mit großer Porengröße machen Agarose zu einem guten Medium für Elektrophorese und Chromatographie. Agarosegele sind einfach und schnell herzustellen und können DNA-Fragmente von etwa 20 bp bis zu vielen Megabasen trennen. Agarosekügelchen werden in großem Umfang für die Säulenchromatographie verwendet, insbesondere für die Größenausschluss- und Affinitätschromatographie.