Stärkehydrolyse durch Amylase

Das Ziel des Experiments ist es, das Enzym Amylase in verschiedenen Umgebungen zu beobachten und jede Umgebung durch Farbveränderungen zu erkennen. Enzyme sind biologische Moleküle, die viele verschiedene chemische Reaktionen katalysieren. Mit wenigen Ausnahmen sind alle Enzyme Proteine und jedes Enzym ist spezifisch für eine bestimmte chemische Reaktion. Enzyme müssen eine bestimmte dreidimensionale Struktur beibehalten, um richtig funktionieren zu können. Wenn die Struktur eines Enzyms verändert wird (durch Hitze oder aggressive Chemikalien), kann es nicht mehr funktionieren. Dieser Zusammenbruch (Denaturierung) der Struktur eines Enzyms kann tödlich sein

Amylase Enzym

Amylase, die häufig im Speichel und in keimenden Samen vorkommt. Sie katalysiert den Abbau von Stärke. Wenn Amylase mit Stärke reagiert, spaltet sie das Disaccharid Maltose (zwei miteinander verbundene Glukosemoleküle) ab. Je weiter die Reaktion fortschreitet, desto weniger Stärke ist vorhanden und desto mehr Zucker (Maltose) ist vorhanden Die Aktivität der Amylase kann mit Hilfe von Jod beobachtet werden, denn Jod reagiert mit Stärke und bildet eine dunkelbraune/violette Farbe. Da die Amylase die Stärke abbaut, wird immer weniger Stärke vorhanden sein und die Farbe der Lösung (bei Zugabe von Jod) wird immer heller. Die Farbveränderung wurde mit Hilfe von Spot-Platten beobachtet, wie im folgenden Diagramm dargestellt.

Die Amylaseaktivität wurde bei vier verschiedenen Behandlungen beobachtet:

Einfluss der Temperatur

Einfluss des pH-Werts

Einfluss der Substratkonzentration

Einfluss der Enzymkonzentration

Die Auswirkungen der Temperatur

Amylase ist ein wichtiges Stoffwechselenzym. Seine Aufgabe ist es, die Hydrolyse von Stärke zu Glukose zu katalysieren. Bei hohen Temperaturen wird Amylase denaturiert, und denaturierte Amylase katalysiert die Hydrolyse von Stärke zu Glukose nicht mehr.

Auswirkung des pH-Werts:

Ausgehend von diesen Ergebnissen, was ist der optimale pH-Wert für Amylase? Gilt dieser optimale pH-Wert als sauer, basisch/alkalisch oder neutral? Warum nimmt die Aktivität ab, wenn der pH-Wert zu niedrig oder zu hoch ist?

APPARATUS

-Stärke

-Amylase Enzym

-KH2P04

-Na2HP04

-HCI

-Heizung

-Becher

-Falkenröhre

-Spektralphotometer

-Iod

VORGEHEN

1.0,27g KH2P04 Pufferlösung PH 5 wurde mit 20ml

2.0,27g KH2P04 PH6 wurde mit 20ml

3.0.27g KH2P04 PH7 wurde mit 100ml

4.0.282g Na2HPO4 PH8 wurde mit 20ml

5.0.282g Na2HP04 PH9 wurde mit 20ml

6.20g Stärke zubereitet, die ebenfalls mit 50ml kaltem Wasser

7 zubereitet wurde. Um die Amylaseaktivität bei unterschiedlichen PH-Werten zu testen, wurden 5ml Stärke, 5ml Puffer (jeweils PH5, 6, 7, 8, 9) und 1ml Amylase miteinander vermischt.

8.10min später wurden 0,5ml der vorbereiteten Probe in 5ml HCI gegeben.

9.Bei 620nm wurden die Ergebnisse am Spektralphotometer gemessen.

10. Zweiter Teil Temperatureffekt,5ml Stärke,5ml PH7 Puffer und 1ml Amylase wurden gemischt.

11.Die vorbereitete Probe wurde in verschiedenen Temperaturen 30,50,70 und 90C.

12.10 min später,5ml HCI wurde in 0,5 ml vorbereitete Probe gegeben.

13.2-3 Minuten später wurden 5 ml Jod in 0,5 ml der neuen Probe gegeben.

14.Die Absorption jeder Probe wurde am Spektralphotometer gemessen.

Beobachtungen

In diesem Experiment haben wir versucht, verschiedene Umgebungen zu schaffen, um die Enzymaktivität der Amylase zu untersuchen.Die Umgebungsunterschiede könnten durch PH-Unterschiede bereitgestellt werden.Deshalb bereiteten wir verschiedene Medium auch verschiedene pHs.K2.Die Grafik wurde fıom unsere Ergebnisse gewonnen.Einer von ihnen ist ein Diagramm, das sich auf Amylase-AktivitÃ?t bei verschiedenen PH.Der andere ist in Bezug auf Amylase-AktivitÃ?t bei verschiedenen Temperaturen bei konstantem PH.Mit K2HPO4 PH 5,6und 7 wurden vorbereitet und mit Na2PO4 8und 9.Jede Vorbereitung Verfahren wurde angewendet.5ml Stärke, 5 ml Puffer, 1 ml Amylase wurden zugegeben und dann 10 Minuten gewartet. Nach 10 Minuten wurden 5 ml HCI in 0,5 ml der Probenmischung zugegeben. Auf die gleiche Weise wurde die Mischung für die Temperaturbeobachtung bei pH 7 hergestellt. Die Absorptionsergebnisse wurden von der Spektrophotometrie genommen.Diese Messung war bei 620nm.

pH Puffer Probe mit Amylase

Nach den Ergebnissen,

Die kleinste kann als eine beste gedacht werden.Wie viel Enzym verwendet wird, ist mehr wesentlicher Punkt.Wenn es weniger ist, bedeutet es, dass die Stärke nicht ausreichend genutzt werden kann.Hohe Stärkemenge bedeutet, dass die komplexe Menge auch hoch ist.Das Gegenteil zeigt die beste Aktivität der Amylase bei der kleinsten Konzentration.Die Farbe ist heller, kleinere Absorption könnte als beste Amylase-Aktivität gedacht werden.

Temperaturprobe mit Amylase

Bei 30C ist die Farbe leicht orange.

Bei 50C ist die Farbe besonders hell wie Jodfarbe.

Bei 70C ist die Farbe leicht lila.

Bei 90C ist die Farbe mehr violett als bei 30C eine wie orange-violett.Bei konstantem PH, die kleine Konzentration, bei 50C.Weil kleine Absorption durch kleine complex.It bedeutet, dass die Menge an Stärke wurde auch verringert.Best Aktivität ist 50C bei konstantem PH.

ERGEBNISSE

Unser Ziel ist es, mit der Aktivität der Amylase in Verbindung gebracht zu werden.

Um diese nachzuweisen, haben wir verschiedene PH-Werte von KHP04 und Na2HP04 durch Zugabe von Säure oder Base hergestellt. Nach der Vorbereitung Puffer, messen wir Absorption bei Spektrophotometrie.Bei verschiedenen PH Absorption geben auch unterschiedliche Konzentration.Wenn Amylase Enzym-Konzentration mit der Probe ist klein, es bedeutet, Enzym verwendet wird, ist komplex mehr klein, so dass die Aktivität des Enzyms ist am besten ein in there.At verschiedenen PHs, kleinste Konzentration ist bei PH 7.And dann haben wir zweiten Teil des Experiments mit PH7.Die Wahl von PH7 steht im Zusammenhang mit der Beobachtung der besten Amylase-Aktivität im ersten Teil.Bei PH7 haben wir die Probe mit der Amylase-Enzym-Konzentration bei verschiedenen PHs genommen.Die kleinste Konzentration ist bei 50C im zweiten Teil.Die Konzentration ist 0,006.Die Farbe ist heller wie Jodfarbe.Stärke wird mit Amylase verwendet und daher ist die komplexe Farbe auch heller.Die Amylase-Enzymaktivität ist am besten bei 50C.Diese Messung wird bei 620nm durchgeführt.

DISKUSSION UND SCHLUSSFOLGERUNG

Warum wird bei 620nm gemessen? Warum wird HCI für die Zubereitung verwendet ? Was bedeutet die helle Farbe?Wie wirkt sich mehr Wärme auf die Röntgenstrahlung aus? Während des Experiments wollen wir den Zweck des Experiments durch die Beantwortung dieser Fragen zu unterscheiden.In diesem Experiment, bezogen wir uns auf die Wirkung der verschiedenen Puffer und Temperatur.Wir bereiteten Puffer bei verschiedenen PH.KH2P04 wurde für PH 5, 6, 7 und Na2HP04 für 8 und 9.Im ersten Teil, bei konstanter Temperatur (Raumtemperatur) Probe mit Amylase-Konzentration gemessen wurde.Bei PH 7 haben wir die kleinste Konzentration gemessen.Kleine Konzentration bedeutet weniger Komplex weniger Stärke und Enzym verwendet wird Enzymaktivität ist hoch.Unser Ergebnis der Messung bei PH 7 ist 0,026.Als zweiter Teil, konstante PH, Temperatur wurde geändert und dann beobachtet die Wirkung davon.Bei 50 C, kleinste Absorption ( 0,0060 )gefunden wurde und die Farbe war extra hell.Es bedeutet mehr weniger Komplex gibt.In diesem Experiment wird Jod verwendet, um Stärkemoleküle durch Beobachtung Farbwechsel zu erkennen.Jod und Stärke wurden kombiniert und dann gebildet complex.The anderen Punkt ist, warum HCI verwendet wird.Die Säure stoppt die enzymatische Reaktion und Jod reagiert mit Stärke, um eine blaue Farbe zu erzeugen.Aktivität des Enzyms ist auch wichtig.Es kann für die Denaturierung Nachweis verwendet werden.Stärke reagiert mit Jod, die gelb ist, um blaue Verbindung zu bilden Amax=620nm.Die Intensität der blauen Farbe kann spektrophotometrisch durch Messung der Absorption bei 620nm quantifiziert werden.