Hello,
A kérdésemet máshol tettem fel, de nem kaptam rá választ, ezért szeretném itt is feltenni, és bocsánat, hogy hülye kérdésnek tűnik, mert nagyon össze vagyok zavarodva !
Elolvastam valahol egy dolgot, ami zavarba hozott a cDNS-sel kapcsolatban. Szeretném tudni, hogy a cDNS kettős szálú vagy egyszálú ?
Tudom, hogy a cDNS az mRNS másolata a fordított transzkriptáz által, így elméletileg egyszálú lenne, igaz, vagy tévedek ?
Köszönöm a visszajelzést
A kérdésemet már máshol feltettem, de nem kaptam választ, ide szeretném feltenni, és bocsánat, hogy hülye kérdésnek tűnik, mert nagyon össze vagyok zavarodva !
Azért olvastam valahol egy dolgot, ami zavarba hozott a cDNS-ről. Szeretném tudni, hogy a cDNS kettős szálú vagy egyszálú ?
Tudom, hogy a cDNS az mRNS másolata a fordított transzkriptáz által, így elméletileg egyszálú lenne, igaz, vagy tévedek ?
Köszönöm a visszajelzést
A legtöbb esetben, például RT-PCR, 3′ vagy 5′ RACE esetén csak egyszálú cDNS-t (az első szál cDNS-t) használunk, míg a cDNS előkészítése esetén a könyvtárépítéshez vagy az RDA/SSH elemzéshez, amely további második szál szintézis lépést igényelhet a két szálú cDNS előállításához.
hi
2 dolgot kell megkülönböztetni :
a cDNS általában az mRNS-szekvenciának nagyjából megfelelő DNS-molekula. Tehát ez egy kétszálú molekula, amely a legtöbb esetben plazmidba van foglalva az expresszióhoz.
RT PCR : az mRNS molekula reverz átíródik cDNS egyszálúvá. Ezután az RNáz eltávolítja az mRNS molekulát, és egyszálú cDNS molekulát kapunk. Mivel a következő lépés egészen klasszikus PCR, egyszálú az exp (és az első lépés, amely megfelel a korreláló második DNS-molekula második szálának sysnthesis visszaállítja a valódi cDNS-molekulát.
A cDNS egy kétszálú molekula, de az egyszerűség kedvéért a cDNS-t is használják az RTPCR fordított átírt molekulájának megtervezéséhez. Fél cDNS-nek vagy egyszálú cDNS-nek kell nevezni.
a cDNS egy rövidítő elnevezés.
míg a legtöbb esetben a cDNS, a komplementer DNS rövidítése, egyszálú DNS-molekulaként definiálják, amelynek nukleotidszekvenciája komplementer egy RNS-molekulához, és amelyet a laboratóriumban az mRNS-ből szintetizálnak fordított átírással…
A cDNS tehát egyszálú, amíg egy PCR reakciót el nem végeznek ? Ok, ebben az esetben a Taq DNS polimeráz hogyan hoz létre egy második komplementer szálat az egyből ? Amikor a két primer ugyanannak a szálnak mindkét oldalához kötődik, hogyan tudják létrehozni a második szálat (az új komplementer szálat) ?
A PCR-ben egy primer egy egyszálú DNS darabhoz kötődik (ezért az első lépés mindig a 94C-on (vagy így) történő dentaturálás, hogy a kettős szálú molekulákat egyszálúvá válasszuk szét. Az RT reakcióból származó első szálú cDNS esetében az első körben csak egy primer kötődik… Ez azt jelenti, hogy az első körben az amplifikáció egy RT-PCR-ben nem logaritmikus akkor egyszerűen szintetizálja a második szál cDNS. A következő fordulókban (2. fordulótól az n. fordulóig) logaritmikus amplifikáció történik, mivel mind az előre-, mind a fordított primer kötődik a denaturált kettősszálú templáthoz.
Az első fordulóban szerintem az előre irányuló primer kötődik… Szerintem ez azért van, mert az mRNS=előrefelé irányuló szál a genomban és az első szál cDNS=komplementje az mRNS-nek (vagy megegyezik a genomban lévő fordított szálzal)
valaki ellenőrizze itt a logikámat, összezavarodtam… jól gondolom, hogy az mRNS a genomi DNS fordított szálának a komplementje?
ie: mRNS szekvencia=forward szál=5′-3′ szekvencia a gDNS-ben (csak U-val nem T-vel)????
HTH
Köszönök mindent, most már világosabb számomra.
Azt hiszem, igen, amíg nem találkozunk egy intronnal, nem ? 
Az NCBI-ban megnézhetjük bármelyik ismert mRNS szekvenciádat, helyreállíthatjuk a genomiális találatot, és összehasonlíthatjuk a szekvenciákat, hogy lássuk, hogy igaz-e vagy sem.
Igen, így van, ki kellene hagyni az intronokat 
Jól hangzik a teszteléshez, később kipróbálom, ha lesz rá lehetőségem, és szólok… minél többet gondolkodom rajta, az mRNS szekvencia=forward strand szekvenciának igaznak kell lennie…
Köszi! 