Bevezetés
A hepatitis B vírus (HBV) fertőzés a májcirrózis és a hepatocelluláris karcinóma leggyakoribb oka Ázsia legtöbb részén.1,2 A krónikus hepatitis patogenezisét a gazdaszervezet immunreakciójának és a HBV-antigéneket prezentáló hepatociták kölcsönhatása közvetíti.3,4 Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a HBV-antigének hepatociták általi expressziója fontos összefüggésben van a krónikus májbetegség stádiumával és aktivitásával. Az immuntolerancia fázisban a hepatitis B core antigének (HBcAg) többnyire a sejtmagban találhatók és a HBV replikációval korrelálnak, míg az ezt követő immun clearance fázisban a HBcAg intrahepatikus eltolódása a sejtmagból a citoplazmába történik, és összefügg a krónikus hepatitis szövettani aktivitásával.5,6,6 Az intrahepatikus hepatitis B felszíni antigén (HBsAg) expressziója esetén három mintázatról számoltak be – homogén típus, I. típusú őrölt üveghepatocita (GGH) és II. típusú GGH. A homogén mintázat csoportos, diszkrét vagy halvány megjelenési formáit magas viremiájú vagy aktív hepatitisben szenvedő betegeknél figyelték meg. Az I. típusú GGH-k jellemzően egyesével szóródnak el a májlebenyekben, zárványszerű sűrű homogén expresszióval, míg a II. típusú GGH-k a hepatociták perifériáján expresszálnak felszíni antigéneket, amelyek csoportokba tömörülnek, és általában az alacsony replikációs fázisban vannak jelen, és az aktív hepatitistől a májcirrózisig és a hepatocelluláris karcinómáig terjednek.7-10 Ennélfogva mind a HBcAg, mind a HBsAg intrahepatikus kifejeződése szorosan kapcsolódik a fertőzés természetes lefolyásához és a HBV-replikációhoz.
A krónikus hepatitis B fázisai közül az immuntisztasági fázis vagy más néven HBeAg-pozitív krónikus hepatitis B gyakran fiatalabb populációban fordult elő, kevésbé súlyos szövettani aktivitást mutatott, és kevesebb precore A1896 mutációt és bazális core promoter (BCP) T1762/A1764 mutációt tartalmazott, mint a HBeAg-negatív krónikus hepatitis B.11.-14 A krónikus hepatitis B lefolyása dinamikus, amely a vírusreplikáció és a gazdaszervezet immunrendszerének kölcsönhatásából ered. Következésképpen a HBeAg-pozitív betegeknél gyakran megfigyelhető a klinikai jellemzők vagy a szövettani aktivitás változatossága. Például a betegek 34-55%-ánál a máj szövettanában áthidaló fibrózis vagy cirrózis, míg a többi betegnél enyhe fibrózis figyelhető meg.15,16 A HBsAg felhalmozódása a hepatocitákban bizonyítottan specifikus vírusmutációkhoz társul, és összefügg a betegség aktivitásával.8,9 Érdekes megvizsgálni az intrahepatikus HBsAg-expresszió jellemzőit a máj szövettanának különböző súlyosságú betegekben.
A vírusmutánsok általában a gazdaszervezet immunfelügyeleti nyomása alatt fejlődnek. A természetben előforduló HBV-mutánsok közül a BCP T1762/A1764 mutációk a betegség progressziójával váltak uralkodóvá, és gyakran találtak összefüggést előrehaladott májbetegséggel és hepatocelluláris karcinómával.17,18 Az intrahepatikus HBsAg-expresszió mintázata is megváltozott a krónikus hepatitis B természetes lefolyása során. A BCP T1762/A1764 mutációk és az intrahepatikus HBsAg-expresszió összefüggése még ismeretlen és tanulmányozásra vár.
Ezért e vizsgálat célja az intrahepatikus HBsAg-expresszió jellemzőinek értékelése és a máj szövettanával, a vírusreplikációs markerekkel és a HBV-mutánsokkal való összefüggés elemzése volt HBeAg-pozitív krónikus hepatitis B-ben.
Anyag és módszerekPáciensek
A vizsgálatba retrospektív módon összesen 181 kezelés-naiv hepatitis B e antigén (HBeAg) pozitív beteget vontak be, akik megfeleltek a befogadási kritériumoknak. A befogadási kritériumok a következők voltak: 18 év feletti és 70 év alatti életkor, több mint 6 hónapja pozitív szérum HBsAg és szérum HBV-DNS-szint ≥ 100 000 kópia/ml, kóros szérum alanin-aminotranszferáz-szint, a krónikus hepatitis egyéb megmagyarázható etiológiája nélkül, beleértve az alkoholt, az autoimmun hepatitist vagy a hepatitis C-vírus, a hepatitis D-vírus vagy a humán immunhiányos vírusfertőzés markereit, valamint a HBV-ellenes kezelés anamnézisének és a szövettani értékeléshez rendelkezésre álló májbiopsziás mintának a hiánya. Valamennyi beteg szérumából és májbiopsziájából az antivirális kezelések előtt vettek mintát, és a mintákat a vizsgálatig -70 oC-on tárolták. Ezt a vizsgálatot a National Cheng Kung University Hospital intézményi felülvizsgálati bizottsága hagyta jóvá (No: ER-99-398). A Helsinki Nyilatkozatnak megfelelően tájékozott beleegyezést szereztünk be.
HBV virológiai vizsgálatok
A HBV genotipizálását multiplex polimeráz láncreakcióval végeztük, a máshol leírtak szerint.19 A szérum HBV DNS-szintjét a COBAS Amplicor HBV Monitor teszt (COBAS-AM assay, Roche Diagnostics, Branchburg, NJ) segítségével mértük. A szérum HBsAg-szintet az Abbott Architect HB-sAg QT (Abbott Diagnostics, Rungis, Franciaország) segítségével számszerűsítették 0,05-250,0 IU/ml dinamikus tartományban. A > 250 IU/mL HBsAg-szintű mintákat 1:20 és 1:1000 hígításban újravizsgáltuk.
Polimeráz láncreakció és a precore és BCP régiók szekvenálása
A HBV DNS-t 50 μl szérumból vontuk ki Blood and Tissue Genomic Mini Kit (VIOGENE, Taipei, Tajvan) segítségével. Az első körös PCR-t a következő körülmények között végeztük: 96 oC 2 percig, 94 oC 1 percig, 54 oC 1 percig és 72 oC 2 percig az 5′-ACCTCTTCTGCACGTAGTAGCATGG (forward) és 3′-GGATTAAAGACAGGTACAGTAGTACAGTAGAAG (reverse) primerekkel. A második körös PCR-t ugyanilyen körülmények között végeztük az 5′-ATGTCAACGACCGACCGACCTTGA (előre) és a 3′-TTCCCACCTTATGATGAGTCTCCAAG (hátra) primerekkel. A megtisztított PCR-termékeket ezután közvetlen szekvenálást végeztünk egy ABI 310 automatizált DNS-szekvenáló és az ABI PRISM Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit (Applied Biosystems) segítségével, a második körös PCR során használt forward primerrel.
Máj szövettan
A máj szövettanát egyetlen patológus értékelte, aki nem ismerte a betegek hátterét. A nekroinflammációt és a fibrózist a Knodell-féle nekroinflammációs fokozat (0 és 18 között)20 , illetve az Ishak-fibrózis stádium (0 és 6 között)21 alapján értékelték.
Az immunhisztokémiai festést máshol leírtak szerint végezték.22 Röviden, a deparaffinizált 5 μm vastagságú metszeteket monoklonális egér anti-HBsAg (3E7 klón, Dako Corp., Carpinteria,USA) és anti-HBcAg (Novocastra Laboratories, Newcastle, Egyesült Királyság) monoklonális anti-HBsAg (3E7 klón, Dako Corp., Carpinteria,USA) festékkel inkubáltuk egy éjszakán át 4°C-on. Az anti-HBsAg vagy anti-HBcAg optimális hígítását HBV-hordozótól származó májszövetet használtunk pozitív kontrollként. A keletkező immunkomplex kimutatására a StrAviGen Super Sensitive MultiLink Kit-et (BioGenex) használták. A peroxidáz aktivitást egy aminoetil-karbazol szubsztrát kit (Zymed Laboratory, Inc, San Francisco, CA) segítségével vizualizáltuk. Végül a metszeteket hematoxilinnel ellenfestették. Negatív kontrollként az inkubációban az elsődleges antitestet nem immunizált egér immunglobulinnal helyettesítettük. A HBcAg expressziójának mintázatát a sejtmagban, a citoplazmában vagy mindkettőben rögzítettük. A HBsAg-expresszió mintázatát homogén, I. típusú GGH, II. típusú GGH kategóriába soroltuk.22 A homogénen festett hepatocitákat olyan hepatocitákként azonosítottuk, amelyek mérsékelten vagy erősen homogén citoplazmatikus festődéssel rendelkeznek; az I. típusú GGH-kat olyan hepatocitákként azonosítottuk, amelyek sűrű globuláris vagy “zárványszerű” festődéssel rendelkeznek, a II. típusú GGH-kat pedig olyan hepatocitákként azonosítottuk, amelyek a sejtek peremén vagy perifériáján felszíni antigénfestődést mutatnak.6,22 Az I. típusú GGH-k egyenként szóródnak szét vagy csoportosulnak a májlebenyekben, míg a II. típusú GGH-k következetesen csomókban csoportosulnak. A HBcAg és a HBsAg expressziós szintjét félkvantitatív módon pontoztuk az immunjelölt sejtek aránya szerint, 0-tól 4+-ig terjedő skálán, ami a vizsgált hepatociták 0, 1-10, 11-25, 25-50% és több mint 50%-ának pozitivitását jelenti.
Statisztikai elemzések
Az adatokat átlag ± standard eltérésként fejeztük ki. A folytonos változókat Mann-Whitney U-teszt vagy Kruskal-Wallis ANOVA segítségével hasonlítottuk össze az egyváltozós elemzéshez. A kategorikus változókat χ2-próbával vagy Fisher egzakt tesztjével elemeztük. Az intrahepatikus HBsAg-expresszió szintjével összefüggő független tényezőket többváltozós logisztikus regressziós elemzéssel végeztük. Az adatkezelést és a statisztikai elemzéseket a 17.0 verziójú SPSS for Windows szoftverrel (SPSS Inc., Chicago, IL) végeztük.
EredményekA bevont betegek jellemzői
Az 1. táblázat a 181 bevont beteg demográfiai jellemzőit tartalmazza. A betegek többsége férfi volt (69,1%), és 63,0%-uk HBV genotípus C-t mutatott. 20 betegnél (11,0%) mutatták ki a precore A1896 mutációt, 38 betegnél (21,0%) pedig a BCP T1762/A1764 mutációt. A 181 beteg közül 105 betegnél (58,0%) mutattak ki pozitív HB-sAg-festést. A HBsAg-festéssel rendelkező betegek szignifikánsan magasabb HBsAg-szérumszintet mutattak (P
A 181 beteg klinikai, virológiai és szövettani jellemzői.
| jellemzők | érték | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| HBsAg expresszió | P érték | ||||
| Minden beteg (n = 181) | Negatív (n = 76) | Pozitív (n = 105) | |||
| Kor (év) ± SD | 36.4 ± 10.5 | 34,2 ± 9,2 | 38,0 ± 11,2 | 0,009 | |
| Nem (férfi/nő) | 125/56 | 50/26 | 75/30 | 0.418 | |
| Átlagos AST-szint (U/L) ± SD | 59,7 ± 51,2 | 58,7 ± 42,5 | 60,5 ± 56.8 | 0,634 | |
| ALT-szint (U/L) ± SD | 116,3 ± 124,2 | 120,2 ± 100,8 | 113,5 ± 139.1 | 0,282 | |
| HBV genotípus (B/C) | 114/67 | 66/10 | 48/57 | ||
| Precore: | 20/161 | 13/63 | 7/98 | 0.027 | |
| BCP:* mutáns/vad | 38/143 | 12/64 | 26/79 | 0.144 | |
| HBV DNS (log példányok/ml) | 8.4 ± 1.1 | 4,0 ± 0,7 | 4,3 ± 0,7 | ||
| HBsAg szint ((log IU/mL) | 4,2 ± 0.7 | 8,1 ± 1,0 | 8,6 ± 1,1 | 0,003 | |
| Mean Knodell necroinflammation grade ± SD | 5.0 ± 3,0 | 5,3 ± 2,8 | 4,7 ± 3,0 | 0,128 | |
| Mérsékelt Ishak fibrózis stádium ± SD | 1,8 ± 1,6 | 1,7 ± 1,2 | 1,9 ± 1,7 | 0.703 | |
Mutáns, T1762 és A1764; vad, A1762 és T1764. A nem, HBV-genotípus, precore és bazális core promóter mutáció változók esetében χ2 tesztet, míg a többi változó esetében Mann-Whitney U tesztet használtunk. AST: aszpartátaminotranszferáz. ALT: alanin-aminotranszferáz. BCP: bazális core promóter. HBV: hepatitis B vírus.
A HBsAg-expresszió eloszlási mintázata
A HBsAg-expressziót mutató 105 beteg tekintetében homogén mintázatot (1A ábra) 34 (32.4%) betegnél, I. típusú GGH-t (1B. ábra) 50 (47,6%) betegnél, II. típusú GGH-t (1C. ábra) hét (6,7%) betegnél, vegyes mintázatot pedig 14 (13,3%) betegnél észleltek. Amint azt a 2. táblázat jelzi, a BCP T1762/A1764 mutációk nagyobb gyakoriságát figyelték meg a II. típusú GGH-ban (P =0,001) a többi mintázathoz képest. A HBsAg-expresszió és a szérum vírusreplikációs markerek között reciprok kapcsolat volt. Az 1D ábrán látható, hogy a II. típusú GGH expresszióval rendelkező betegeknél alacsonyabb volt a HBV-DNS-szint és a HBsAg-titer, de magasabb az intrahepatikus HBsAg-expresszió szintje (1D ábra). Emellett a II-es típusú GGH-t mutató máj szövettanilag szignifikánsan súlyosabb májnekroinflammációt és fibrózisaktivitást, valamint magasabb intrahepatikus HBsAg-expressziós szintet mutatott (1E ábra).
A HBsAg-t tartalmazó minták. A. Néhány mérsékelten vagy erősen homogén citoplazmával HBsAg-gal festett hepatocita (nyilak) a gyengén festett hepatociták hátterében. Az egyes homogénen festett hepatociták sejtmagja a sejt közepén helyezkedett el. B. I. I. típusú őrölt üveghepatocita (GGH) sűrű globuláris vagy “zárványszerű” HBsAg-festődéssel (nyilak) elszórtan a májparenchimában. C. A II-es típusú GGH-k egy csoportja HBsAg-festődést mutatott a sejt peremén vagy perifériáján. A HBsAg-expressziós mintázat és a szérum HBV-DNS-szint (Da), a szérum HBsAg-szint (Db) és az intrahepatikus HBsAg-expressziós szint (Dc) korrelációja. A HBsAg-expressziós mintázatok és a Knodell-nekroinflammációs fokozat (Ea) és az Ishake-fibrózis stádium (Eb) összefüggése. A csoportok közötti összehasonlításokat Kruskal-Wallis ANOVA-val elemeztük.
Demográfiai jellemzők a f HBsAg expressziós mintázat eloszlása szerint.
| HBsAg minta (n = 105) | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Kevert (n = 14) | Homogén | I. típusú GGH | II. típusú GGH | P-érték | ||
| (n = 34) | (n = 50) | (n = 7) | ||||
| Kor (év) ± SD | 36.3 ± 9.2 | 36.3 ± 10.0 | 39.2 ± 12.7 | 40.0 ± 7.9 | 0.104 | |
| Nem (férfi/nő) | 11/3 | 26/11 | 35/15 | 6/1 | 0.720 | |
| Átlagos AST-szint (U/L) ± SD | 64,9 ± 56,5 | 61,1 ± 38,6 | 49,9 ± 28,3 | 122.4 ± 168,7 | 0,474 | |
| ALT-szint (U/L) ± SD | 116,7 ± 112,4 | 114,6 ± 91,1 | 91,5 ± 63,8 | 259,1 ± 447.6 | 0,651 | |
| HBV genotípus (B/C) | 10/4 | 15/19 | 22/28 | 1/6 | 0,085 | |
| Precore: G1896/A1896 | 0/14 | 3/31 | 4/46 | 0/7 | 0.594 | |
| BCP:* mutáns/vad | 4/10 | 4/30 | 12/38 | 6/1 | 0.001 | |
| HBV DNS (log kópiák/ml) | 3,9 ± 1,0 | 4.5 ± 0,5 | 4,4 ± 0,7 | 3,6 ± 0,5 | 0,001 | |
| HBsAg szint ((log IU/mL) | 8,2 ± 1.1 | 8,9 ± 0,7 | 8,7 ± 1,1 | 6,9 ± 1,5 | ||
| Knodell necroinflammation grade ± SD | 4.2 ± 2.9 | 4.2 ± 3.3 | 4.7 ± 2.7 | 8.6 ± 2.0 | 0.003 | |
| Ishak fibrózis stádium ± SD | 1,9 ± 1,9 | 1,9 ± 1,9 | 1,5 ± 1,3 | 4,1 ± 1,5 | 0.007 |
Mutáns, T1762 és A1764; vad, A1762 és T1764. A nem, HBV-genotípus, precore és bazális core promóter mutáció változók esetében χ2 tesztet, míg a többi változó esetében Mann-Whitney U tesztet használtunk. AST: aszpartát-aminotranszferáz. ALT: alanin-aminotranszferáz. BCP: bazális core promóter. HBV: hepatitis B vírus.
HBsAg expressziós szint
A 2A-2D ábra a HBsAg expressziójának szemikvantitatív mérését mutatja be. Ebben a vizsgálatban nem volt olyan beteg, akinek a HBsAg-expressziója 4+ skálán állt volna. A vírusreplikáció és a máj szövettana között reciprok kapcsolat volt megfigyelhető. A 2+/3+ skálájú HBsAg-expresszióval rendelkező betegeknél alacsonyabb volt a HBsAg-titer és a HBV-DNS-szint, de szignifikánsan súlyosabb volt a nekroinflammációs fokozat és a fibrózis stádiuma, mint az 1+ skálájú HBsAg-expresszióval és negatív HBsAg-festéssel rendelkező betegeknél (2E. ábra). Azoknál a betegeknél, akiknél a Knodell-nekroinflammációs fokozat ≥ 5 pontszám vagy az Ishake-fibrózis stádium ≥ 1 volt, szignifikánsan magasabb volt a HBsAg-expresszió százalékos aránya (3. ábra).
HBsAg expresszió félkvantitatív módon mérve az immunjelölt sejtek aránya szerint, 0-3+ skálán, ami a vizsgált hepatociták (A) 0% (0), (B) 1-10% (C) 11-25% (2+) és (D) 25-50% (3+) pozitivitásának felel meg. A HBsAg-expressziós szint és a szérum HBV-DNS (Ea) és HBsAg-szint (Eb), valamint a Knodell-nekroinflammációs fokozat (Ec) és az Ishak-fibrózis stádium (Ed) korrelációi. A csoportok közötti összehasonlításokat Kruskal-Wallis ANOVA-val elemeztük.
A HBsAg intrahepatikus expressziójának korrelációja a Knodell nekroinflammációs fokozattal (A) és az Ishak-fibrózis stádiummal (B). A csoportok közötti összehasonlításokat Mann-Whitney U-teszttel elemeztük.
A HBsAg-expresszió klinikai jellemzői
Először a vírusos tényezők és a HBcAg/HBsAg-expresszió összefüggését vizsgáltuk. A HBsAg-expresszió, nem pedig a HBcAg-expresszió, szignifikánsan alacsonyabb szintet mutatott a precore-mutáció jelenlétében (P = 0,001). A C genotípusú betegeknél a májfibrózis stádiuma nagyobb volt (P = 0,004). A BCP T1762/A1764 mutációval rendelkező betegeknél szignifikánsan nagyobb volt a nekroinflammációs fokozat és a fibrózis stádium, valamint alacsonyabb a HBcAg-expresszió akár a citoplazmában, akár a sejtmagban. Mindezek a megfigyelések aktív májkárosodásra utaltak. Ezenkívül a BCP T1762/A1764 mutációval rendelkező betegeknél magasabb intrahepatikus HBsAg-expresszió volt megfigyelhető (9,3 ± 8,0% vs. 4,3 ± 5,0%, P = 0,008) (3. táblázat). Megvizsgáltuk továbbá azokat a tényezőket, amelyek összefüggésbe hozhatók a HB-sAg-expresszió szintjével. A 4. táblázatban 16 betegnél mutatták ki a HBsAg-expresszió 2+/3+ skáláját, 89 betegnél pedig 1+ skálát. Az egyváltozós elemzés azt mutatta, hogy a HBsAg-expresszió 2+/3+ skálája a BCP T1762/A1764 mutációkkal, valamint a súlyosabb májnekroinflammációval és fibrózissal állt összefüggésben. A többváltozós regressziós elemzés kimutatta, hogy a BCP T1762/A1764 mutációk voltak az a független tényező, amely összefüggésbe hozható volt az intrahepatikus HBsAg-expresszió 2+/3+ skálájával.
A vírusmutánsokkal rendelkező és nem rendelkező betegek klinikai, virológiai és szövettani jellemzői.
| Precore mutáció | P érték | BCP mutációk | P érték | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Nem (n = 98) | Igen (n = 7) | Nem (n = 79) | Igen (n = 26) | ||||
| Kor (év) ± SD | 37.8 ±11.0 | 40.0 ± 13.7 | 0.541 | 36,0 ± 10,6 | 43,8 ±11,1 | 0,005 | |
| Nem (férfi/nő) | 70/28 | 5/2 | 1,000 | 54/25 | 21/5 | 0.318 | |
| Átlagos AST-szint (U/L) ± SD | 60,0 ± 58,3 | 71,3 ± 30,5 | 0,072 | 51,5 ± 32,1 | 87,3 ± 95.6 | 0.007 | |
| ALT-szint (U/L) ±SD | 112.2 ± 143.6 | 131.6 ± 39.1 | 0.031 | 98.2 ± 77.9 | 160.0 ± 242.0 | 0.080 | |
| HBV genotípus (B/C) | 45/53 | 3/4 | 1.000 | 44/35 | 4/22 | ||
| Precore: G1896/A1896 | 6/73 | 1/25 | 0.678 | ||||
| BCP:* mutáns/vad | 25/73 | 1/6 | 0.678 | ||||
| HBV DNS (log példányok/ml) | 3,9 ± 1,0 | 4,5 ± 0.5 | 0,959 | 4,5 ± 0,6 | 3,7 ± 0,6 | ||
| HBsAg szint ((log IU/mL) | 8.2 ± 1,1 | 8,9 ± 0,7 | 0,892 | 8,8 ± 0,9 | 7,7 ± 1,4 | ||
| Knodell necroinflammation grade ± SD | 4,6 ± 3,0 | 6.1 ± 3,1 | 0,142 | 3,9 ± 2,7 | 7,2 ± 2,7 | ||
| Ishak fibrózis stádium ± SD | 1,8 ± 1,8 | 2,1 ± 0,9 | 0.286 | 1,3 ± 1,4 | 3,4 ± 1,6 | ||
| HBcAg citoplazma expresszió (%) | 53,6 ± 25,8 | 44,3 ± 30,5 | 0,402 | 56,3 ± 25.4 | 42,7 ± 25,8 | 0,018 | |
| HBcAg nukleáris expresszió (%) | 13,5 ± 17,3 | 17,6 ± 31,6 | 0,800 | 17,6 ± 20,0 | 2,3 ±4.1 | ||
| HBsAg expresszió (%) | 5,8 ± 6,5 | 2,4 ± 1,5 | 0,274 | 4,3 ± 5,0 | 9,3 ± 8,0 | 0.003 | |
Mutáns, T1762 és A1764; vad, A1762 és T1764. A nem, HBV-genotípus, precore és bazális core promóter mutáció változók esetében χ2 tesztet, míg a többi változó esetében Mann-Whitney U tesztet használtunk. AST: aszpartátaminotranszferáz. ALT: alanin-aminotranszferáz. BCP: bazális core promóter. HBV: hepatitis B vírus.
A demográfiai jellemzők és a HBsAg expresszió mértékének összefüggése.
| Univariate | Multivariate | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| HBsAg expresszió, Skála | 1+ (n = 89) | 2+/3+ (n = 16) | P érték | Odds ratio (95% CI) | P érték |
| Age | 38.2 ±11.2 | 36.6 ±11.1 | 0.608 | 0.963 (0.903-1.026) | 0.242 |
| Nem (férfi/nő) | 63/26 | 12/4 | 1.000 | ||
| AST szint (U/L) | 55,0 ± 37,7 | 90,4 ± 113,2 | 0,234 | 1,026 (0,991∼1.063) | 0,142 |
| ALT szint (U/L) | 103,3 ± 84,4 | 170,1 ± 297,2 | 0,386 | 0,991 (0,978∼1.005) | 0.216 |
| HBV genotípus (B/C) | 42/47 | 6/10 | 0.589 | 0.994 (0.234∼4.231) | 0.994 |
| Precore A1896 mutáció (+/-) | 7/82 | 0/16 | 0.592 | 0.000 (0.000∼) | 0.999 |
| BCP:*mutant/Wild | 17/72 | 9/7 | 0.003 | 6.356 (1.204∼33.356) | 0.029 |
| HBsAg szint (log10IU/mL) | 4,3 ± 0,7 | 4,2 ± 0,8 | 0,180 | 2,096 (0,598∼7,349) | 0.247 |
| Szérum HBV DNS (log10 kópia/ml) | 8,6 ± 1,1 | 8,1 ± 1,4 | 0,135 | 0,731 (0,386∼1,383) | 0.335 |
| Knodell necroinflammation grading | 4,4 ± 2,9 | 6,3 ± 3,3 | 0,027 | ||
| Ishak fibrosis fokozat | 1.7 ± 1,6 | 2,9 ± 2,1 | 0,041 | ||
| HBcAg citoplazma expresszió (%) | 53.1 ± 25,8 | 52,3 ± 28,5 | 0,915 | ||
| HBcAg nukleáris expresszió (%) | 14,4 ± 18,3 | 10.1 ± 19,3 | 0,389 | ||
Mutáns, T1762 és A1764; vad, A1762 és T1764. Univariáns elemzés: a nem, a HBV-genotípus, a precore és a bazális core promóter mutáció változók esetében χ2 tesztet, míg a többi változó esetében Mann-Whitney U tesztet alkalmaztunk. Többváltozós elemzés: Logisztikus regressziós elemzés esélyhányadosként kifejezve, 95%-os konfidenciaintervallummal és P-értékekkel. AST: aszpartátaminotranszferáz. ALT: alanin-aminotranszferáz. BCP: bazális mag promóter. HBV: hepatitis B vírus.
Diszkusszió
Az intrahepatikus HBsAg-expresszió a krónikus hepatitis B természetes lefolyása során a különböző replikatív szakaszokhoz és a betegségfejlődéshez kapcsolódik.7,10,23 Az I. típusú GGH túlnyomórészt az aktív hepatitis stádiumban, míg a II. típusú GGH főként az inaktív vagy cirrózis stádiumban jelentkezik.8 Ebben a tanulmányban kimutattuk, hogy a II. típusú GGH a máj szövettanának súlyosabb állapotához társult, szignifikánsan alacsonyabb szérum HBV-DNS-szintekkel és HBsAg-titerrel, valamint viszonylag magasabb intrahepatikus HBsAg-expresszióval társult. A máj szövettana és a HBV-replikáció közötti kölcsönös kapcsolat azt jelezte, hogy a II. típusú GGH előfordulása a HBeAg-pozitív krónikus hepatitis B-ben a betegség fejlődése során az előrehaladott májbetegség markere lehet. A HB-sAg expressziójának mintázata összefügg a különböző vírusmutációkkal, amelyek hatással vannak a HBV-replikáció szabályozására és a hepatociták felszíni antigénszekréciójának hibájára.9,24 . A II. típusú GGH következetesen Pre-S2 deléciós mutációkat hordozott, amelyek csökkentették a középső felszíni fehérjék szintézisét, majd a nagy felszíni fehérjék felhalmozódását eredményezték a hepatocitákban és a HBsAg-szekréció hibáját.25 Ebben a vizsgálatban a szérum HBsAg és HBV-DNS korrelációját végeztük a II. típusú GGH-val rendelkező és nem rendelkező betegek között. Mérsékelt korrelációt mutattunk a két HBV-replikációs mutató között a II-es típusú GGH nélküli betegeknél (r = 0,686, P 26,27 A Pre-S deléció ER stresszhez vezethet és aktiválhatja a stresszel kapcsolatos jelátvitelt. A hepatocita DNS oxidatív károsodása, majd a DNS-javító mechanizmusok stimulálása genomi instabilitást eredményezhet, ami súlyosbítja a májkárosodást és hajlamosít a karcinogenezisre.28
A HBsAg expressziós mintázatán kívül azt találtuk, hogy a magasabb expressziós szint a máj szövettani aktivitásának súlyosabb fokával és a BCP T1762/A1764 mutációk magasabb arányával járt együtt. A BCP T1762/A1764 mutációk erősen összefüggnek a máj súlyos szövettani aktivitásával és a májrákkal.29,30 Tudomásunk szerint szoros kapcsolat van a C genotípus és a BCP T1762/ A1764 mutációk jelenléte között.30 Ebben a vizsgálatban úgy tűnt, hogy a C genotípus nem játszik szerepet a HBsAg expressziós szintjében. Ezzel szemben a BCP T1762/A1764 mutációk szoros összefüggést mutattak a HBsAg-expresszióval. Ami a vírusmutációt illeti, a BCP T1762/A1764 mutációk alapul szolgálhatnak más HBV-mutációkhoz, beleértve a pre-S deléciót és a BCP T1762/ A1764 mutációk jelenlétében gyakran előforduló komplex mutációkat. A komplex HBV-mutánsok részleges vagy teljes hibát mutattak az e, a core és a felszíni fehérjék expressziójában és szekréciójában.31 A csökkent hepatitis B felszíni antigén szekréció korrelált a felszíni fehérjék aberráns lokalizációjával az ER-ben, és a HBsAg magas expresszióját eredményezte. Ezenkívül a BCP T1762/A1764 mutációt a vírus fitneszének következményének tekintik a gazdaszervezet immunfelügyeletének szelekciós nyomása miatt. Hasonlóképpen, a pre-S2 mutációk, amelyek a II-es típusú GGH-ban rejtőznek, egybeesnek a humán leukocita antigénre korlátozott T- és B-sejt epitópokkal.32 A II-es típusú GGH-k körül általában nincs sejtnekrózis vagy T-limfocita infiltráció, ami arra utal, hogy a pre-S2 deléciós mutáció megjelenésével a HBV is egy esetlegesen újszerű menekülő mutáns.33 A felszíni antigén felhalmozódása a hepatocitákban azonban a pre-S vagy S genomban vagy a felszíni promóterekben lévő ismert vírusmutációk hordozása nélkül is megtörténhet.31,34 Ezért a HBsAg-expresszió szekvencia lehet vírusmutációkkal együtt vagy anélkül.
A vizsgálatnak számos lehetséges korlátja volt. A tanulmányban szereplő megfigyelések retrospektív keresztmetszeti elrendezésen alapultak, de nem végeztek longitudinális követést. A HBsAg expressziós szintje a hepatocitákban és a szövettani súlyosság változhat a máj különböző részein egy betegnél; a májbiopszia önmagában nem reprezentálhat pontosan semmilyen májszövetet, kivéve a biopsziás magot.
Összefoglalva, a II. típusú GGH mintázatot vagy magasabb intrahepatikus HBsAg-expressziós szintet mutató betegeknél a súlyosabb máj szövettani aktivitás és az alacsonyabb HBV-replikációs kapacitás közötti kölcsönös kapcsolat áll fenn. Az intrahepatikus HBsAg-expresszió és a BCP T1762/A1764 mutációk közötti erős összefüggés azt jelezte, hogy a HBsAg-expresszió valószínűleg a HBV genomikus evolúciója során a gazdaszervezet immunnyomása alatt bekövetkező szövettani megnyilvánulásnak tekinthető.
A rövidítések
- –
BCP: basal core promoter.
- –
GGH: őrölt üveghepatocita.
- –
HBcAg: hepatitis B core antigén.
- –
HBeAg: hepatitis B e antigén.
- –
HBsAg: hepatitis B felszíni antigén.
- –
HBV: hepatitis B vírus.
érdekellentétek
T.-T. C. kutatási támogatást kapott a Gilead Sciences, a Bristol-Myers Squibb Company, a Glaxo-SmithKline, a Merck Sharp & Dohme (I.A.) Corporation és a Pfizer Inc. cégektől. A többi szerző esetében nincs összeférhetetlenség.