An investigation into the kinetics and regulatory properties of the type-1-es típusú foszfofruktokináz (PFK) vizsgálata egy olyan enzimet tár fel, amelyet a PEP gátol és az ADP aktivál azáltal, hogy a szubsztrát fruktóz-6-foszfát (Fru-6-P) iránti affinitását más prokarióta PFK-khoz hasonló módon módosítja. A TtPFK azonban mindkét allosztérikus ligandumhoz lényegesen szorosabban kötődik, mint más bakteriális PFK-k, miközben 25 °C-on lényegesen szerényebb mértékű gátlást vagy aktiválást eredményez, megerősítve azt az elvet, hogy a kötési affinitás és a hatékonyság független és nem korrelál egymással. Ezek a tulajdonságok lehetővé tették számunkra, hogy szigorúan megállapítsuk, hogy a PEP csak a Fru-6-P kötődésének antagonizálásával gátol, és nem a forgalom befolyásolásával, amely következtetés megköveteli a kcat meghatározását olyan körülmények között, ahol az inhibitor és a szubsztrát egyszerre telítődik. Ezenkívül a Fru-6-P megkötésére gyakorolt alloszterikus hatások hőmérsékletfüggése azt jelzi, hogy a kapcsolási szabad energiák entrópia-domináltak, ahogyan azt korábban a Bacillus stearothermophilusból származó PFK esetében megfigyelték, de az Escherichia coliból származó PFK esetében nem, ami alátámasztja azt a feltételezést, hogy az entrópia-dominált alloszterikus hatások a termosztatikus organizmusokból származó enzimek jellemzői lehetnek. Az ilyen enzimek esetében az alloszterikus hatás kiváltó oka nem biztos, hogy könnyen felismerhető az olyan statikus szerkezeti információkból, mint amilyeneket a röntgenkrisztallográfiából nyerünk.