A kísérlet célja az amiláz enzim megfigyelése különböző környezetben, és az egyes környezetek érzékelése a színváltozások segítésével. Az enzimek olyan biológiai molekulák, amelyek számos különböző kémiai reakciót katalizálnak. Néhány kivételtől eltekintve minden enzim fehérje, és minden enzim egy bizonyos kémiai reakcióra specifikus. Az enzimeknek meghatározott háromdimenziós szerkezetet kell fenntartaniuk ahhoz, hogy megfelelően működjenek. Ha egy enzim szerkezete megváltozik (hő vagy durva vegyszerek hatására), előfordulhat, hogy egyáltalán nem működik. Az enzim szerkezetének ez a lebomlása (denaturálódása) végzetes lehet
Ha segítségre van szükséged az esszéd megírásához, professzionális esszéíró szolgálatunk segít!
Tudj meg többet
Amiláz enzim
Az amiláz, amely általában a nyálban és a csírázó magvakban található. A keményítő lebontását katalizálja. Amikor az amiláz reagál a keményítővel, levágja a diszacharid maltózt (két egymáshoz kapcsolódó glükózmolekula). A reakció előrehaladtával kevesebb keményítő és több cukor (malátacukor) lesz jelen. az amiláz aktivitása jód segítségével figyelhető meg. a jód ugyanis a keményítővel reagálva sötétbarna/lila színűvé válik. Ahogy az amiláz lebontja a keményítőt, egyre kevesebb keményítő lesz jelen, és az oldat színe (jód hozzáadásával) egyre világosabbá válik. A színváltozást spot-lemezek segítségével figyeltük meg az alábbi ábrán látható módon.
Az amiláz aktivitását négy különböző kezelés mellett figyeltük meg:
a hőmérséklet hatása
a pH hatása
a szubsztrát koncentráció hatása
az enzim koncentráció hatása
A hőmérséklet hatása
Az amiláz egy fontos metabolikus enzim. Feladata a keményítő glükózzá történő hidrolízisének katalizálása. Magas hőmérsékleten az amiláz denaturálódik, a denaturált amiláz már nem katalizálja a keményítő glükózzá történő hidrolízisét.
A pH HATÁSA:
Az eredmények alapján mi az optimális pH az amiláz számára? Ez az optimális pH savasnak, bázikus/lúgosnak vagy semlegesnek tekinthető? Miért csökken az aktivitás, ha a pH túl alacsony vagy túl magas?
APPARATUS
-Keményítő
-Amiláz enzim
-KH2P04
-Na2HP04
-HCI
-Melegítő
-Beakert
-Falcon cső
-Spektrofotométer
-Jód
ELJÁRÁS
1.0,27 g KH2P04 pufferoldatot PH 5 20ml
2.0,27 g KH2P04 PH6 pufferoldatot 20ml
3.0.27g KH2P04 PH7 készült 100ml
4.0.282g Na2HPO4 PH8 készült 20ml
5.0.282g Na2HP04 PH9 készült 20ml
6.20g keményítővel szintén 50ml hideg vízzel
7. Az amiláz aktivitás vizsgálatához PH különbséggel,5ml keményítőt ,5ml puffert(PH5,6,7,8,9 egyenként) és 1ml amilázt kevertünk össze egymással.
8.10perc múlva,0,5ml előkészített mintát 5ml HCI-be tettünk.
9.620nm-en,az eredményeket spektrofotométerrel mértük.
10. Második rész hőmérséklet hatása,5ml keményítőt,5ml PH7 puffert és 1ml amilázt kevertünk.
11.Az előkészített mintát különböző hőmérsékletre tettük 30,50,70 és 90C.
12.10 perc múlva 5ml HCI-t tettünk 0,5ml előkészített mintába.
13.2-3 perc múlva,5ml jódot adtunk 0,5ml új mintába
14.Mindegyik abszorbanciáját spektrofotométeren mértük.
Észrevételek
Ebben a kísérletben megpróbáltunk különböző környezetet teremteni az amiláz enzimaktivitás vizsgálatához.A környezeti különbségeket PH-különbségekkel lehetett biztosítani.Ezért különböző közeget készítettünk különböző pH-kkal is.K2.Az eredményeinkből grafikonokat kaptunk.Az egyik grafikon az amiláz aktivitással kapcsolatos a különböző PH-k mellett.A másik az amiláz aktivitással kapcsolatos a különböző hőmérsékleteken állandó PH mellett.K2HPO4-vel PH 5,6 és 7, Na2PO4-gyel pedig 8 és 9.Mindegyik előkészítési eljárást alkalmaztuk.5ml keményítőt, 5 ml puffert, 1 ml amilázt adtunk egymáshoz, majd 10 percig vártunk.10 perc elteltével 5 ml HCI-t adtunk 0,5 ml mintakeverékhez.Ugyanígy készítettük el a hőmérséklet megfigyelésére szolgáló keveréket PH 7-hez.Az eljárás végén jódot adtunk hozzá. Az abszorbancia eredményeket spektrofotometriából vettük.Ez a mérés 620nm-en történt.
pH puffer minta amilázzal
Az eredmények alapján,
A legkisebbet lehet a legjobbnak gondolni.Hogy mennyi enzimet használunk az lényegesebb pont.Ha kevesebb, az azt jelenti, hogy a keményítőt nem lehet megfelelően felhasználni.A magas keményítőmennyiség azt jelenti, hogy a komplex mennyisége is magas.Az ellenkezője mutatja a legjobb amiláz aktivitást a legkisebb koncentráció mellett.A szín világosabb, a kisebb abszorbancia a legjobb amiláz aktivitásnak tekinthető.
Hőmérsékletű minta amilázzal
30C-on a szín enyhén narancssárga.
50C-on a szín extra világos, mint a jód szín.
70C-on a szín enyhén lila.
90C-on a szín lilább, mint 30C-on, mint a narancs-lila.Állandó PH-nál ,a kis koncentráció ,50C-nél.Mert a kis abszorbancia kis komplexet képez.Ez azt jelenti, hogy a keményítő mennyisége is csökkent.A legjobb aktivitás 50C állandó PH-nál.
Akadémiai szakértőink készen állnak arra, hogy bármilyen írásbeli projektben segítsenek. Az egyszerű esszétervektől kezdve a teljes diplomamunkákig garantálhatjuk, hogy az Ön igényeinek tökéletesen megfelelő szolgáltatással állunk rendelkezésére.
Tekintse meg szolgáltatásainkat
Eredmények
Célunk az amiláz aktivitásával kapcsolatos, ennek kimutatásához KHP04-ből és Na2HP04-ből sav vagy bázis hozzáadásával különböző PH-t készítettünk. Mindkettő felhasználása a puffer intervallumához kapcsolódik.Miután elkészítettük a puffert, spektrofotometriával mértük az abszorbanciát.A különböző PH értékeknél az abszorbancia különböző koncentrációt is ad.Ha az amiláz enzim koncentrációja a mintával kicsi, ez azt jelenti, hogy az enzim használt komplex kisebb, így az enzim aktivitása a legjobb ott.A különböző PH értékeknél a legkisebb koncentráció PH 7-nél van.És ezután a kísérlet második részét PH7 használatával végeztük.A PH7 kiválasztása az első rész legjobb amiláz aktivitásának megfigyeléséhez kapcsolódik.A PH7-nél vettünk mintát az amiláz enzim koncentrációjával különböző PH-koncentrációknál.A második részben a legkisebb koncentráció 50C-nél van.A koncentráció 0,006-os.A szín világosabb, mint a jód színe.A keményítőt amilázzal együtt használjuk, ezért a komplex színe is világosabb.Az amiláz enzim aktivitása 50C-on a legjobb.Ezt a mérést 620nm-en végezzük.
DISZKURZUS ÉS KÖVETKEZTETÉS
Miért 620nm-en mérjük? Miért HCI-t használnak az előkészítéshez ? Mit jelent a világos szín?Hogyan befolyásolja a több hő az rxn-t? A kísérlet során a fenti kérdések megválaszolásával a kísérlet célját szeretnénk tisztázni.Ebben a kísérletben a különböző pufferek és a hőmérséklet hatásával foglalkoztunk.Különböző PH értékű puffereket készítettünk.KH2P04-et készítettünk a PH 5,6,7 és Na2HP04-et a 8 és 9 PH értékekhez.Az első részben állandó hőmérsékleten (szobahőmérsékleten) az amiláz koncentrációjú mintát mértük.A PH 7,mértük a legkisebb.Kis koncentráció azt jelenti, kevesebb komplex kevesebb keményítő és enzim használt enzim aktivitás magas.A mérési eredményünk PH 7-nél 0,026.Mint egy második rész ,állandó PH,hőmérséklet változott, majd megfigyeltük a hatását.50 C-on a legkisebb abszorbanciát ( 0,0060 ) találtuk, és a szín extra világos volt.Ez azt jelenti, hogy kevesebb komplex van.Ebben a kísérletben jódot használtunk a keményítő molekulák kimutatására a színváltozás megfigyelésével.A jód és a keményítő egyesült, majd komplexet képezett.A másik pont az, hogy miért használtunk HCI-t?A sav leállítja az enzimatikus reakciót, és a jód reagál a keményítővel, és kék színt hoz létre.Az enzim aktivitása is lényeges.A denaturáció kimutatására is használható.A keményítő reagál a jóddal, amely sárga, és kék vegyületet képez Amax=620nm.A kék szín intenzitása spektrofotometriásan számszerűsíthető a 620nm-en mért abszorbancia mérésével.