FLAG-tag

A FLAG-tag, vagy FLAG-oktapeptid, vagy FLAG-epitóp egy rekombináns DNS-technológiával egy fehérjéhez adható polipeptid fehérjetag, amely a DYKDDDDK (ahol D=aszparaginsav, Y=tirozin és K=lizin) szekvenciamotívummal rendelkezik. Ez az egyik legspecifikusabb tag, és ez egy mesterséges antigén, amelyhez specifikus, nagy affinitású monoklonális antitesteket fejlesztettek ki, és így felhasználható a fehérjék affinitáskromatográfiás tisztítására, valamint a fehérjék élő sejteken belüli lokalizálására is. A rekombináns, túlexpresszált fehérje és a gazdaszervezet által expresszált vad típusú fehérje elválasztására használták. A több alegységet tartalmazó fehérjekomplexek izolálására is használható, mivel enyhe tisztítási eljárása hajlamos arra, hogy az ilyen komplexeket ne zavarja meg. Megfelelő tisztaságú és minőségű fehérjék kinyerésére használták, hogy röntgenkrisztallográfiás 3D szerkezetmeghatározást végezzenek.

A FLAG-tag számos különböző, antitest általi felismerést igénylő vizsgálatban használható. Ha egy adott fehérje ellen nincs antitest, a FLAG-tag hozzáadása a fehérjéhez lehetővé teszi a fehérje vizsgálatát a FLAG-szekvencia elleni antitesttel. Ilyenek például a sejtlokalizációs vizsgálatok immunfluoreszcenciával, immunprecipitációval vagy kimutatás SDS PAGE fehérjeelektroforézissel és Western blottinggal.

A FLAG-tag peptidszekvenciája az N-terminustól a C-terminusig a következő: DYKDDDDK (1012 Da). Ezenkívül tandemben is használható, általában a 3xFLAG peptid: DYKDHD-G-DYKDHDHD-I-DYKDDDDK (az utolsó tag egy enterokináz hasítási helyet kódol). Fuzionálható egy fehérje C-terminusához vagy N-terminusához, vagy beilleszthető egy fehérjébe. Néhány kereskedelmi forgalomban kapható antitest (pl. M1/4E11) csak akkor ismeri fel az epitópot, ha az az N-terminuson van jelen. Más elérhető antitestek (pl. M2) azonban pozíció-érzéketlenek. A FLAG-tag tirozin-maradványa szulfatálódhat, ami befolyásolhatja a FLAG-epitóp antitest-felismerését. A FLAG-tag más affinitási tagekkel, például polihisztidin-taggal (His-tag), HA-taggal vagy myc-taggal együtt is használható.

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.