Lo scopo dell’esperimento è di osservare l’enzima amilasi in diversi ambienti e rilevare ogni ambiente aiutando i cambiamenti di colore. Gli enzimi sono molecole biologiche che catalizzano molte reazioni chimiche diverse. Con poche eccezioni, tutti gli enzimi sono proteine e ogni enzima è specifico per una certa reazione chimica. Gli enzimi devono mantenere una specifica struttura tridimensionale per funzionare correttamente. Se la struttura di un enzima viene alterata (dal calore o da sostanze chimiche aggressive) può non funzionare affatto. Questa rottura (denaturazione) della struttura di un enzima può essere fatale
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Enzima amilasi
L’amilasi, che si trova comunemente nella saliva e nei semi in germinazione. Catalizza la scomposizione dell’amido. Quando l’amilasi reagisce con l’amido, taglia il disaccaride maltosio (due molecole di glucosio legate insieme). Man mano che la reazione procede, meno amido sarà presente e più zucchero (maltosio) sarà presente.L’attività dell’amilasi può essere osservata usando lo iodio.Perché lo iodio reagisce con l’amido per formare un colore marrone scuro/viola. Man mano che l’amilasi rompe l’amido, sempre meno amido sarà presente e il colore della soluzione (se viene aggiunto lo iodio) diventerà sempre più chiaro. Il cambiamento di colore è stato osservato usando piastre spot come illustrato nel diagramma sottostante.
L’attività dell’amilasi è stata osservata sotto quattro diversi trattamenti:
effetto della temperatura
effetto del pH
effetto della concentrazione del substrato
effetto della concentrazione dell’enzima
Gli effetti della temperatura
L’amilasi è un importante enzima metabolico. La sua funzione è quella di catalizzare l’idrolisi dell’amido in glucosio. Alle alte temperature, l’amilasi diventa denaturata, l’amilasi denaturata non catalizza più l’idrolisi dell’amido in glucosio.
EFFETTO DEL pH:
In base a questi risultati, qual è il pH ottimale per l’amilasi? Questo pH ottimale è considerato acido, basico/alcalino o neutro? Perché l’attività diminuisce quando il pH è troppo basso o troppo alto?
APPARATO
Amido
Enzima amilasi
-KH2P04
-Na2HP04
-HCI
-Riscaldatore
-Beaker
-Tubo Falcon
-Spettrofotometro
-Iodio
PROCEDIMENTO
1.0,27 g di soluzione tampone KH2P04 PH 5 è stato preparato con 20ml
2,0,27g di KH2P04 PH6 è stato preparato con 20ml
3,0.27g KH2P04 PH7 è stato preparato con 100ml
4.0.282g Na2HPO4 PH8 è stato preparato con 20ml
5.0.282g Na2HP04 PH9 è stato preparato con 20ml
6.20g di amido è stato preparato anche con 50ml di acqua fredda
7. Per testare l’attività dell’amilasi con la differenza di PH, 5ml di amido, 5ml di tampone (PH5, 6, 7, 8, 9 sono usati ciascuno) e 1ml di amilasi sono stati mescolati tra loro.
8.10min dopo, 0.5ml di campione preparato è stato messo in 5ml di HCI.
9.A 620nm, i risultati sono stati misurati allo spettrofotometro.
10. Seconda parte dell’effetto della temperatura, 5ml di amido, 5ml di tampone PH7 e 1ml di amilasi sono stati mescolati.
11.Il campione preparato è stato messo a diverse temperature 30,50,70 e 90C.
12.10 minuti dopo, 5ml di HCI sono stati messi in 0,5 ml di campione preparato.
13.2-3 minuti dopo, 5ml di iodio è stato aggiunto in 0.5ml di nuovo campione
14.L’assorbanza di ciascuno è stata misurata allo spettrofotometro.
Osservazioni
In questo esperimento, abbiamo provato a creare un ambiente diverso per esaminare l’attività dell’enzima amilasi.Le differenze di ambiente potrebbero essere fornite dalle differenze di PH.Pertanto abbiamo preparato diversi mezzi anche diversi pH.K2.Il grafico è stato ottenuto dai nostri risultati.Uno di loro è un grafico che si riferisce all’attività dell’amilasi a PH diversi.L’altro è relazionato all’attività dell’amilasi a diverse temperature a PH costante.Con K2HPO4 PH 5.6e 7 sono stati preparati e con Na2PO4 8e 9.Ogni procedura di preparazione è stata applicata.55 ml di amido, 5 ml di tampone, 1 ml di amilasi sono stati aggiunti l’uno all’altro e poi hanno aspettato 10 minuti. Dopo 10 minuti, 5 ml di HCI sono stati aggiunti in 0,5 ml di miscela campione. Allo stesso modo, la miscela per l’osservazione della temperatura è stata preparata a pH 7. E aggiunto lo iodio alla fine della procedura. I risultati dell’assorbanza sono stati presi dalla spettrofotometria, questa misurazione era a 620nm.
Campione di tampone pH con amilasi
Secondo i risultati,
il più piccolo può essere pensato come il migliore.Quanto enzima è usato è il punto più essenziale.Se è meno, significa che l’amido non può essere usato adeguatamente. un’alta quantità di amido significa che anche la quantità di complesso è alta. quella opposta mostra la migliore attività dell’amilasi alla più piccola concentrazione. il colore è più chiaro, la più piccola assorbanza potrebbe essere pensata come migliore attività dell’amilasi.
Campione di temperatura con amilasi
A 30C il colore è leggermente arancione.
A 50C il colore è molto chiaro come il colore dello iodio.
A 70C il colore è leggermente viola.
A 90C il colore è più viola che a 30C uno come arancio-viola.A PH costante, la piccola concentrazione, a 50C.Because piccola assorbanza formata da piccolo complesso.Significa che la quantità di amido era diminuita anche.Best attività è 50C a PH costante.
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RISULTATI
Il nostro obiettivo è quello di essere legati all’attività dell’amilasi.Per rilevarlo, abbiamo preparato diversi PH da KHP04 e Na2HP04 aggiungendo acido o base. Se la concentrazione dell’enzima amilasi con il campione è piccola, significa che l’enzima usato è un complesso più piccolo, quindi l’attività dell’enzima è la migliore in assoluto. a diversi PH, la concentrazione più piccola è a PH 7. E poi abbiamo fatto la seconda parte dell’esperimento usando PH7.La scelta di PH7 è collegata all’osservazione della migliore attività dell’amilasi alla prima parte. A PH7 abbiamo preso il campione con la concentrazione dell’enzima dell’amilasi a diversi pH. la più piccola concentrazione è a 50C nella seconda parte. la concentrazione è 0.006.Il colore è più chiaro come il colore dello iodio.L’amido è usato con l’amilasi e quindi il colore complesso è più chiaro anche.L’attività dell’enzima amilasi è la migliore a 50C.Questa misurazione è fatta a 620nm.
DISCUSSIONE E CONCLUSIONE
Perché si misura a 620nm? Perché si usa l’HCI per la preparazione? Che cosa significa il colore della luce? In che modo un maggior calore influisce sul rxn? Durante l’esperimento, vogliamo distinguere lo scopo dell’esperimento rispondendo a queste domande. In questo esperimento, ci siamo riferiti all’effetto di tamponi diversi e alla temperatura. Abbiamo preparato tamponi a PH diversi. KH2P04 è stato preparato per PH 5, 6, 7 e Na2HP04 per 8 e 9. Nella prima parte, a temperatura costante (temperatura ambiente) è stato misurato il campione con la concentrazione di amilasi.A PH 7, abbiamo misurato il più piccolo one.Small concentrazione significa meno complesso meno amido e l’enzima viene utilizzato attività enzimatica è high.Our risultato dalla misurazione a PH 7 è 0.026.As una seconda parte, PH costante, temperatura è stata cambiata e poi osservato l’effetto di esso.A 50 C, l’assorbanza più piccola (0.0060) è stata trovata e il colore era extra chiaro. significa più meno complesso lì. in questo esperimento, lo iodio è usato per rilevare le molecole di amido osservando il cambiamento di colore. lo iodio e l’amido sono stati combinati e poi formato complesso. l’altro punto è perché HCI è usato.L’acido ferma la reazione enzimatica e lo iodio reagisce con l’amido per produrre il colore blu.L’attività dell’enzima è anche essenziale.Può essere usato per il rilevamento della denaturazione.L’amido reagisce con lo iodio che è giallo per formare il composto blu Amax=620nm.L’intensità del colore blu può essere quantificata spettrofotometricamente misurando la sua assorbanza a 620nm.