Fissazione, lavorazione e inclusione ottimali sono i primi passi critici per consentire l’esame istologico della morfologia del tessuto e la localizzazione dei biomarcatori nei campioni di tessuto. La cura in queste fasi iniziali porta a una maggiore qualità di colorazione, imaging e analisi molecolare nelle fasi successive del flusso di lavoro istologico. Questo articolo è una breve panoramica dei comuni schemi di fissazione, lavorazione e inclusione per i tessuti di roditori FFPE.
Fissazione
La fissazione ottimale dei campioni istologici è essenziale per la conservazione dell’architettura del tessuto, comprese le cellule, i componenti cellulari (cioè, citoplasma, nuclei, organelli), il materiale extracellulare e i componenti molecolari (cioè, proteine, DNA, mRNA). Ci sono molti diversi fissatori disponibili, e ognuno ha i suoi vantaggi e svantaggi a seconda dell’applicazione. Puoi leggere di più sui diversi fissativi dei tessuti usando la ricerca Talk to Books di Google.
Il fissativo più comunemente usato nella patologia diagnostica di routine è la formalina neutra tamponata al 10% (10% NBF). Questo fissativo si traduce tipicamente in una buona conservazione dei tessuti; tuttavia, fattori come il tempo di fissazione, la temperatura, il pH e lo spessore del campione devono essere presi in considerazione per ottenere i migliori risultati.
Campioni: il tessuto dovrebbe essere tagliato ad uno spessore di 3 – 5 mm prima di essere messo nel fissativo.
Volume: dovrebbe essere usata almeno una parte di tessuto per 20 parti di fissativo. Il fissativo dovrebbe essere privo di sangue.
Tempo: i tessuti sono comunemente fissati per 24 ore a temperatura ambiente prima della trasformazione in cera di paraffina.
Stoccaggio: i tessuti possono essere conservati in etanolo al 70% dopo la fissazione. Questo non è raccomandato per il cervello o altri campioni neurologici.
Tessuti come gli occhi, i polmoni, l’intestino e le ossa possono richiedere fissativi diversi e/o un trattamento speciale, si prega di contattare Reveal Biosciences per ulteriori informazioni.
Lavorazione dei tessuti
I tessuti fissati sono in genere lavorati in cera di paraffina utilizzando processori automatici di tessuti. La lavorazione automatizzata dei tessuti comporta l’immersione dei campioni in una serie definita di soluzioni tra cui alcoli, xilene e cera di paraffina. Ogni fase può essere personalizzata controllando tempo, temperatura e pressione/vuoto (P/V) per garantire una buona penetrazione della soluzione nei campioni. I nostri istologi hanno sviluppato una serie di programmi di trattamento dei tessuti specificamente progettati per diversi tipi di tessuto.
Imbedding
L’embedding di alta qualità comporta l’orientamento coerente di tutti i campioni dello stesso tipo di tessuto. I campioni possono essere incorporati in blocchi in una varietà di orientamenti su richiesta; tuttavia, in genere seguiamo le linee guida del Registry of Industrial Toxicology Animal (RITA) e del North American Control Animal Database (NACAD) per l’incorporazione dei tessuti dei roditori. Assicurati di specificare in anticipo se il tuo studio richiede un diverso orientamento per l’inclusione dei tessuti e saremo lieti di soddisfare la tua richiesta.
In sintesi, la fissazione, la lavorazione e l’inclusione ottimali sono i primi passi critici per consentire l’esame della morfologia dei tessuti e la localizzazione dei biomarcatori nei campioni di tessuto. Contattateci per qualsiasi domanda o per discutere le vostre esigenze di studio e saremo lieti di aiutarvi.
In sintesi, la fissazione, il trattamento e l’incapsulamento ottimali sono i primi passi fondamentali per consentire l’esame della morfologia dei tessuti e la localizzazione dei biomarcatori nei campioni di tessuto.