FLAG-tag (FLAG octapeptide, or FLAG epitope) は、組み換えDNA技術を用いてタンパク質に付加できるポリペプチドタグで、DYKDDDDK(ここでD=アスパラギン酸、Y=チロシン、K=リジン)の配列モチーフを持つものです。 最も特異性の高いタグの一つであり、特異的かつ高親和性のモノクローナル抗体が開発された人工抗原であるため、アフィニティークロマトグラフィーによるタンパク質精製や、生細胞内のタンパク質の位置確認に利用することができる。 宿主生物によって発現された野生型タンパク質から組換え、過剰発現されたタンパク質を分離するために使用されています。 また、精製方法がマイルドであるため、複数のサブユニットを持つタンパク質複合体の分離にも使用できる。 1193>
FLAGタグは、抗体による認識を必要とする様々なアッセイで使用することができます。 あるタンパク質に対する抗体がない場合、タンパク質にFLAGタグを追加することで、FLAG配列に対する抗体でタンパク質を研究することができるようになります。 例えば、免疫蛍光法による細胞局在研究、免疫沈降法、あるいはSDS PAGEタンパク質電気泳動やウェスタンブロッティングによる検出などが挙げられる。
N末端からC末端までのFLAG-tagのペプチド配列は次の通りである。 DYKDDDDK (1012 Da)である。 さらに、タンデムで使用することもでき、一般的には3xFLAGペプチドである。 DYKDHD-G-DYKDHD-I-DYKDDDDK(最後のタグはエンテロキナーゼ切断部位をコードしている)。 タンパク質のC末端やN末端に融合させたり、タンパク質内に挿入したりすることができる。 市販の抗体(例えば、M1/4E11)の中には、エピトープがN末に存在する場合のみ認識するものがある。 しかし、他の市販の抗体(例えば、M2)は、その位置に依存しない。 FLAGタグのチロシン残基は硫酸化されていることがあり、FLAGエピトープの抗体認識に影響を与えることがある。 FLAGタグは、他のアフィニティタグ、例えばポリヒスチジンタグ(Hisタグ)、HAタグまたはmycタグと組み合わせて使用することができる
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