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Senseal discovery of basic principles underlying molecular cloning since you are the fundamental principles, DNA断片の組み換えの容易さと速度を向上させるために、多くのクローニング戦略が開発されてきました。 分子クローニングで最も一般的に使用されている戦略をお読みください。また、GenEZ™ ORFクローンを使用して、ご希望の遺伝子をご希望のベクターで簡単に取得することができます。
Traditional Cloning
PCRクローニングとも呼ばれる従来のクローニングでは、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）を用いて目的のテンプレート配列（通常は目的の遺伝子）を増幅し、その配列の末端に制限部位を付加する必要があります。 制限酵素は目的の鋳型と標的ベクターの両方を切断するために用いられ、DNAリガーゼは鋳型とベクターの粘着性末端を結合させるために使われる。 従来のクローニングでは、柔軟なDNA配列の操作が可能であり、ほぼすべての目的の構築物を容易に構築することができる。
TA Cloning
TA クローニングは最も単純なクローニングの一つである。 この方法では、5’チミンオーバーハングを含むベクターが、TAQポリメラーゼ増幅の性質によってさらに3’アデノシンオーバーハングが付加されたPCR産物を受け入れるために使用される。 TAクローニングは、制限消化のステップが必要ないため、簡単で迅速という利点がある。 また、TAクローニングキットには、あらかじめベクター、リガーゼ、バッファーが混合された反応バッファーが含まれており、ライゲーション反応時間を5分程度まで短縮することができます。 TAクローニング技術の欠点は、クローニングに方向性がないことである。つまり、目的の遺伝子はターゲットベクターにセンスまたはアンチセンスのどちらかの方向で挿入される可能性があるということである。 通常、その後の形質転換体の半数はセンス方向の遺伝子を含み、半数はアンチセンス方向の遺伝子を含むことになる。 しかし、毒性遺伝子で形質転換された細胞は、センス方向の遺伝子を含む細胞は生き残れないので、すべてアンチセンス方向の遺伝子を表示することができる。 さらに、センス方向に配向した毒性遺伝子を含む生存細胞は、より毒性の低いタンパク質をコードするように変異させることができる。
Seamless cloning
Seamless cloning技術により制限酵素は必要ない。 これは、挿入物がその配列内に多数の制限部位を含み、クローニング手順の間に目的の遺伝子を切断しない制限酵素を特定することが困難な場合に有利となる。 シームレスクローニングは相同組換えを利用したもので、この技術には多くのバリエーションがある。 一般的には、インサートとベクターに約15bpの長さのflanking配列をPCRで付加することで行われる。 エキソヌクレアーゼでインサートとベクターの配列を噛み合わせ、リコンビナーゼ酵素やDNAリガーゼでDNAを結合させる。 シームレスクローニングは、ターゲットベクターと組換え反応に必要な酵素を独自に混合したキットの開発により簡素化された。 例えば、GenScriptのGenBuilder™ Kitは10kbまでのインサートを30分でクローニングすることができ、ハイスループットのクローニングプロジェクトにも使用することができる。