O propósito da experiência é observar a enzima amilase em diferentes ambientes e detectar cada ambiente, ajudando nas mudanças de cor. Enzimas são moléculas biológicas que catalisam muitas reacções químicas diferentes. Com poucas exceções, todas as enzimas são proteínas e cada enzima é específica para uma determinada reação química. As enzimas devem manter uma estrutura tridimensional específica para que funcionem adequadamente. Se a estrutura de uma enzima for alterada (pelo calor ou por produtos químicos fortes) ela pode não funcionar de todo. Esta quebra (desnaturação) da estrutura de uma enzima pode ser fatal
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Amilase Enzyme
Amilase, que é normalmente encontrada na saliva e sementes germinativas. Catalisa a decomposição do amido. Quando a amilase reage com o amido, ela corta a maltose dissacarídeo (duas moléculas de glicose ligadas entre si). A atividade da amilase pode ser observada pelo uso de iodo, pois o iodo reage com o amido para formar uma cor marrom escuro/púrpura. Como a amilase quebra o amido, menos e menos amido estará presente e a cor da solução (se for adicionado iodo) se tornará cada vez mais clara. A mudança de cor foi observada usando placas de cor mancha como ilustrado no diagrama abaixo.
Atividade da amilase foi observada sob quatro tratamentos diferentes:
efeito da temperatura
efeito do pH
efeito da concentração do substrato
efeito da concentração da enzima
Os efeitos da temperatura
A amilase é uma enzima metabólica importante. A sua função é catalisar a hidrólise do amido em glicose. A altas temperaturas, a amilase torna-se desnaturada, a amilase desnaturada já não catalisa a hidrólise do amido em glicose.
FEITO DO pH:
Baseado nestes resultados, qual é o pH ideal para a amilase? Este pH ideal é considerado ácido, básico/alcalino, ou neutro? Porque é que a actividade diminui quando o pH é demasiado baixo ou demasiado alto?
APPARATUS
-Starch
-Amylase Enzyme
-KH2P04
-Na2HP04
-HCI
-Aquecedor
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-Passador
-Tubo Falcon
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-Spectrofotómetro
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-Iodo
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PROCEDIMENTO
1.0,27 g de solução tampão KH2P04 PH 5 foi preparado com 20ml
2,0,27g de KH2P04 PH6 foi preparado com 20ml
3,0.27g KH2P04 PH7 foi preparado com 100ml
4.0.282g Na2HPO4 PH8 foi preparado com 20ml
5.0.282g Na2HP04 PH9 foi preparado com 20ml
6.20g Amido também foi preparado com 50ml de água fria
7. Para testar a atividade da amilase com diferença de PH,5ml de amido,5ml de tampão(PH5,6,7,8,9 cada) e 1ml de amilase foram misturados um ao outro.
8,10min depois,0,5ml de amostra preparada foi colocada em 5ml de HCI.
9,9,9,9,00m, os resultados foram medidos no espectrofotômetro.
10. Efeito da temperatura da segunda parte,5ml de amido,5ml de tampão PH7 e 1ml de amilase foram misturados.
11.Amostra preparada foi colocada em temperatura diferente 30,50,70 e 90C.
12,10 minutos depois,5ml de HCI foi colocado em 0,5 ml de amostra preparada.
13.2-3 minutos depois,5ml de iodo foram adicionados em 0,5ml de nova amostra
14.A absorção de cada um foi medida no espectrofotômetro.
OBSERVAÇÕES
Neste experimento, tentamos criar um ambiente diferente para examinar a atividade da enzima amilase.O gráfico foi obtido a partir dos nossos resultados. Um deles é um gráfico relacionado à atividade da amilase em diferentes PH. O outro é relativo à atividade da amilase em diferentes temperaturas com PH constante. Com K2HPO4 foram preparados PH 5,6 e 7 e com Na2PO4 foram aplicados 8 e 9,cada procedimento de preparação.5Foram adicionados um ao outro, 5 ml de amilase, 1 ml de amilase e depois esperou-se 10 min. Após 10min.,5 ml de HCI foram adicionados a 0,5 ml de mistura da amostra, da mesma forma, a mistura para observação da temperatura foi preparada com pH 7 e adicionado iodo ao final do procedimento. Esta medição foi feita a 620nm.
pH amostra tampão com amilase
De acordo com os resultados,
A menor pode ser pensada como a melhor.Se for menos uma, significa que o amido não pode ser usado adequadamente. A quantidade elevada de amido significa que a quantidade complexa também é elevada. O oposto mostra a melhor actividade amilase na menor concentração.
Amostra de temperatura com amilase
A 30C a cor é ligeiramente alaranjada.
A 50C a cor é mais clara como a cor do iodo.
A 70C a cor é ligeiramente púrpura.
A 90C a cor é mais púrpura do que a 30C uma como a cor de laranja-púrpura. A pH constante, a pequena concentração, a 50C.
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RESULTADOS
Nosso objetivo é estar relacionado à atividade da amilase.Para detectá-la, preparamos PH diferente de KHP04 e Na2HP04, adicionando ácido ou base. Após a preparação, medimos a absorvância em espectrofotometria, e com diferentes absorvâncias de PH, também damos diferentes concentrações. Se a concentração da enzima amilase com a amostra é pequena, significa que a enzima é usada complexa é mais pequena, então a atividade da enzima é a melhor, com diferentes PH, a menor concentração está em PH 7, e então fizemos a segunda parte do experimento usando PH7.A escolha da PH7 está relacionada com a melhor atividade de observação da amilase na primeira parte. Na PH7 tiramos amostra com concentração da enzima amilase em diferentes PHs, a menor concentração está em 50C na segunda parte, a concentração é de 0,006.A cor é mais clara como a cor de iodo, o amido é usado com amilase e portanto a cor complexa também é mais clara. A atividade da enzima amilase é melhor a 50C. Esta medida é feita a 620nm.
DISCUSSÃO E CONCLUSÃO
Por que é medida a 620nm ? Por que HCI é usado para a preparação ? O que significa Cor clara? Como é que mais calor afecta o rxn? Durante o experimento, nós queremos ter um propósito distinto de experimento respondendo a esta pergunta. Neste experimento, nós relacionamos o efeito de diferentes tampão e temperatura. Nós preparamos tampões em diferentes PH.KH2P04 foi preparado para PH 5,6,7 e Na2HP04 para 8 e 9. Na primeira parte, a temperatura constante (temperatura ambiente) da amostra com concentração de amilase foi medida.No PH 7, medimos a menor. Pequena concentração significa menos complexo menos amido e é usada enzima. A atividade enzimática é alta. Nosso resultado da medição no PH 7 é 0,026. Como segunda parte, o PH constante, a temperatura foi alterada e então foi observado o efeito da mesma.A 50 C, a menor absorvância (0,0060) foi encontrada e a cor era mais clara, o que significa menos complexo, pois nesta experiência o iodo é usado para detectar moléculas de amido observando a mudança de cor, o iodo e o amido foram combinados e depois formados complexos, o outro ponto é porque o HCI é usado.O ácido pára a reação enzimática e o iodo reage com o amido para produzir a cor azul. A atividade da enzima também é essencial para a detecção da desnaturação, o amido reage com o iodo que é amarelo para formar o composto azul Amax=620nm.