A fixação, processamento e incorporação são os primeiros passos críticos para permitir o exame histológico da morfologia do tecido e a localização dos biomarcadores nas amostras de tecido. Os cuidados nessas etapas iniciais levam a uma coloração, imagens e análise molecular de maior qualidade em fases posteriores do fluxo de trabalho da histologia. Este artigo é uma breve visão geral dos esquemas comuns de fixação, processamento e incorporação de tecido roedor FFPE.
Fixação
A fixação ideal de amostras histológicas é essencial para a preservação da arquitetura tecidual, incluindo células, componentes celulares (ou seja, citoplasma, núcleos, organelas), material extracelular e componentes moleculares (ou seja, proteínas, DNA, mRNA). Há muitos fixadores diferentes disponíveis, e cada um tem suas vantagens e desvantagens dependendo da aplicação. Você pode ler mais sobre diferentes fixadores teciduais usando a pesquisa Talk to Books do Google.
O fixador mais comum usado na patologia diagnóstica de rotina é 10% de Formalina Tampão Neutro (10% NBF). Este fixador normalmente resulta numa boa preservação dos tecidos; no entanto, factores como o tempo de fixação, temperatura, pH e espessura da amostra devem ser tidos em conta para se obterem os melhores resultados.
Espécimens: o tecido deve ser aparado a uma espessura de 3 – 5 mm antes de ser colocado no fixador.
Volume: pelo menos uma parte de tecido a 20 partes de fixador deve ser usada. O fixador deve estar livre de sangue.
Tempo: os tecidos são normalmente fixados durante 24 horas à temperatura ambiente antes do processamento em parafina.
Armazenamento: os tecidos podem ser armazenados em etanol a 70% após a fixação. Isto não é recomendado para o cérebro ou outras amostras neurológicas.
Os tecidos como olhos, pulmões, intestinos e ossos podem necessitar de diferentes fixadores e/ou processamento especial, por favor contacte a Reveal Biosciences para mais informações.
Processamento de tecidos
Os tecidos fixados são tipicamente processados em cera de parafina usando processadores de tecidos automatizados. O processamento automatizado de tecidos envolve a imersão de amostras em uma série definida de soluções incluindo álcoois, xileno e cera de parafina. Cada etapa pode ser personalizada através do controle de tempo, temperatura e pressão/vácuo (P/V) para garantir uma boa penetração da solução nas amostras. Nossos histologistas desenvolveram uma série de programas de processamento de tecidos especificamente projetados para diferentes tipos de tecidos.
Embedding
Basing de alta qualidade envolve a orientação consistente de todas as amostras do mesmo tipo de tecido. As amostras podem ser embutidas em blocos em uma variedade de orientações mediante solicitação; no entanto, normalmente seguimos as Diretrizes do Registro de Toxicologia Industrial Animal (RITA) e do Banco de Dados Norte-Americano de Animais de Controle (NACAD) para embutimento de tecido roedor. Por favor, certifique-se de especificar antecipadamente se o seu estudo requer uma orientação de incorporação de tecido diferente e teremos prazer em acomodar sua solicitação.
Em resumo, a fixação, processamento e incorporação ideais são os primeiros passos críticos para permitir o exame da morfologia do tecido e a localização de biomarcadores nas amostras de tecido. Entre em contato conosco para qualquer dúvida ou para discutir suas necessidades de estudo e ficaremos felizes em ajudar.