Proteina legată de receptorul lipoproteinei de joasă densitate (LRP), membră a familiei de gene a receptorilor lipoproteinei de joasă densitate, mediază absorbția celulară a unei diversități de liganzi. Un chaperon de pliere, proteina de 39 kDa asociată receptorului (RAP), care rezidă în compartimentele timpurii ale căii secretorii, inhibă legarea tuturor liganzilor la receptor și poate servi la prevenirea legării premature a liganzilor la receptor în timpul traficului către suprafața celulară. Pentru a elucida interacțiunile moleculare care stau la baza interacțiunii dintre receptor, RAP și liganzi, am analizat și delimitat situsurile de legare ale inhibitorului-1 al activatorului de plasminogen (PAI-1), ale complexului activator de plasminogen de tip tisular (t-PA).PAI-1, ale RAP și ale fragmentului Fab Fab A8 anti-LRP. În acest scop, am generat o serie de fragmente recombinante solubile care cuprind cel de-al doilea grup de repetări de tip complement (C3-C10) și repetiția factorului de creștere epidermică (E4) din flancul amino-terminal al LRP (E4-C10; aminoacizi 787-1165). Toate fragmentele au fost exprimate prin celule de rinichi de baby hamster transfectate în mod stabil și purificate prin cromatografie de afinitate. Un studiu detaliat al legării ligandului la fragmente cu ajutorul rezonanței plasmonului de suprafață a evidențiat prezența a trei situsuri de legare a ligandului distincte, dependente de Ca2+, în domeniul cluster II (Cl-II) al LRP. Complexele t-PA.PAI-1, precum și PAI-1 se leagă la un domeniu situat în porțiunea amino-terminală a Cl-II, care cuprinde repetițiile E4-C3-C7. Adiacent acestui sit și parțial suprapus este un sit de legare a RAP de mare afinitate, situat pe repetițiile C5-C7. Fab A8, un pseudo-ligand al receptorului, se leagă de un al treilea sit de legare dependent de Ca2+ pe repetițiile C8-C10 la capătul carboxil-terminal al Cl-II. În continuare, am studiat inhibarea mediată de RAP a legării ligandului la LRP și la Cl-II. Așa cum era de așteptat, am observat o inhibiție puternică a legăturii complexului t-PA.PAI-1 și Fab A8 la LRP de către RAP (IC50 congruentă cu 0,3 nM), în timp ce în experimentul invers, competiția t-PA. PAI-1 și a complexelor Fab A8 pentru legarea RAP la LRP a putut fi evidențiată numai la concentrații ridicate de competitori (>/=1 microM). Este interesant faptul că, deși constantele de disociere la echilibru pentru legarea RAP la LRP și la Cl-II sunt similare, legarea liganzilor la Cl-II este împiedicată de RAP numai la concentrații care sunt cu cel puțin 2 ordine de mărime mai mari decât cele necesare pentru inhibarea legării ligandului la LRP. Rezultatele noastre favorizează modelele care propun inhibarea alosterică indusă de RAP a legării ligandului la LRP, care ar putea necesita părți ale LRP care sunt situate în afara Cl-II a receptorului.