Bună ziua,
Am postat întrebarea mea în altă parte, dar nu am primit răspuns, aș dori să o postez aici și, îmi pare rău că pare o întrebare stupidă, pentru că sunt foarte confuz !
Am citit undeva un lucru care m-a lăsat perplex cu privire la cDNA. Aș vrea să știu dacă cADN-ul este bicatenar sau monocatenar ?
Știu că cADN-ul este copia ARNm prin transcriptază inversă deci, teoretic, ar fi monocatenar , corect sau greșesc ?Mulțumesc pentru răspuns
Am postat întrebarea mea în altă parte dar nu am primit răspuns, aș dori să o postez aici și, îmi pare rău că pare o întrebare stupidă, pentru că sunt foarte confuz !
Am citit undeva un lucru care m-a lăsat perplex în legătură cu cADN-ul. Aș vrea să știu dacă cADN-ul este bicatenar sau monocatenar ?
Știu că cADN-ul este copia ARNm prin transcriptază inversă deci, teoretic, ar fi monocatenar , corect sau greșesc ?
Mulțumesc pentru feedback-ul dvs.
Pentru majoritatea cazurilor, cum ar fi RT-PCR, 3′ sau 5′ RACE, folosim doar ADNc monocatenar (ADNc monocatenar), în timp ce în cazul pregătirii ADNc pentru construirea de biblioteci sau pentru analiza RDA/SSH, care ar putea necesita o etapă suplimentară de sinteză a celui de-al doilea filament pentru a genera ADNc bicatenar.
hi
trebuie să diferențiați 2 lucruri :
ADNc în general este molecula de ADN care corespunde aproximativ la seuqența ARNm. Deci este o moleculă bicatenară inclusă în plasmidă pentru exprimare în majoritatea cazurilor.
RT PCR : molecula de ARNm este transcrisă invers în ADNc monocatenar. După acest moment, RNaza elimină molecula de ARNm și se obține o moleculă de ADNc monocatenar. Deoarece următoarea etapă este destul de clasică PCR, un singur catenar este ok pentru exp (și prima etapă, care corespunde cu sistarea celui de-al doilea catenar corespunzător unei molecule de ADN restabilește molecula reală de ADNc.
Pentru a avea dreptate, ADNc este o moleculă bicatenară, dar, pentru comoditate, ADNc este folosit și pentru proiectarea moleculei transcrise invers din RTPCR. Acesta ar trebui să fie denumit ADNc pe jumătate cDNA sau ADNc monocatenar.
ADNc este o denumire prescurtată.
în timp ce, în majoritatea cazurilor, ADNc, abrevierea de ADN complementar, este definit ca o moleculă de ADN monocatenar cu o secvență de nucleotide care este complementară unei molecule de ARN și este sintetizată în laborator din ARNm prin transcriere inversă….
Deci, ADNc este monocatenar până când se realizează o reacție PCR ? Ok, în acest caz, cum generează Taq ADN polimeraza un al doilea catenar complementar din unul singur ? Când cei doi amorsori se annează de fiecare parte a aceluiași catenă, cum pot produce a doua catenă (noua catenă complementară) ?
În PCR un amors se leagă de o bucată monocatenară de ADN (de aceea primul pas este întotdeauna dentarea la 94C(sau cam așa ceva) pentru a separa orice moleculă bicatenară în monocatenară. În cazul ADNc din primul lanț provenit dintr-o reacție RT, doar un singur primer se leagă în prima rundă… Acest lucru înseamnă că prima rundă de amplificare într-o RT-PCR nu este logaritmică, pur și simplu sintetizezi al doilea șir de ADNc. În rundele ulterioare (de la runda 2 până la runda n) există o amplificare logaritmică deoarece atât amorsorul direct cât și cel invers se leagă de șablonul dublu catenar denaturat.
În prima rundă, cred că amorsa directă este cea care se leagă… Cred că acest lucru se datorează faptului că ARNm=bandă directă în genom, iar prima catenă ADNc=complement al ARNm (sau este la fel ca și catena inversă din genom)
Să-mi verifice cineva logica aici, mă confundez… este corect că ARNm este complementul catenei inverse a ADN-ului genomic?
adică: secvența ARNm = șirul direct = secvența 5′-3′ din ADNg (doar cu U, nu cu T)???
HTH
Mulțumesc pentru tot, este mai clar pentru mine acum.
Cred că da, da, până se întâlnește un intron, nu ? 
Putem verifica în NCBI oricare dintre secvențele de ARNm cunoscute, să recuperăm rezultatul genomic și să comparăm secvențele pentru a vedea dacă este adevărat sau nu.
Da, așa este, ar trebui să săriți intronii 
Sună ca o modalitate bună de a testa, voi încerca mai târziu dacă am ocazia și vă voi anunța… cu cât mă gândesc mai mult la asta, secvența ARNm=secvența de șir înainte trebuie să fie corectă totuși…
Mulțumesc! 