FLAG-tag

FLAG-tag, sau octapeptida FLAG, sau epitopul FLAG, este o etichetă proteică polipeptidică care poate fi adăugată la o proteină utilizând tehnologia ADN recombinant, având motivul secvențial DYKDDDDK (unde D=acid aspartic, Y=tirozină și K=lizină). Este una dintre cele mai specifice etichete și este un antigen artificial pentru care au fost dezvoltați anticorpi monoclonali specifici de mare afinitate și, prin urmare, poate fi utilizat pentru purificarea proteinelor prin cromatografie de afinitate și, de asemenea, poate fi utilizat pentru localizarea proteinelor în interiorul celulelor vii. Acesta a fost utilizat pentru a separa proteina recombinantă, supraexprimată, de proteina de tip sălbatic exprimată de organismul gazdă. De asemenea, poate fi utilizat pentru izolarea complexelor proteice cu subunități multiple, deoarece procedura sa de purificare blândă tinde să nu perturbe astfel de complexe. A fost utilizată pentru a obține proteine de o puritate și calitate suficiente pentru a realiza determinarea structurii 3D prin cristalografie cu raze X.

Un FLAG-tag poate fi utilizat în multe teste diferite care necesită recunoașterea de către un anticorp. Dacă nu există un anticorp împotriva unei anumite proteine, adăugarea unui FLAG-tag la o proteină permite ca proteina să fie studiată cu un anticorp împotriva secvenței FLAG. Exemple sunt studiile de localizare celulară prin imunofluorescență, imunoprecipitare sau detectarea prin electroforeza proteinelor SDS PAGE și Western blotting.

Secvența peptidică a FLAG-tag-ului de la extremitatea N-terminală la extremitatea C-terminală este: DYKDDDDDDK (1012 Da). În plus, poate fi utilizată în tandem, în mod obișnuit peptida 3xFLAG: DYKDHD-DYKDHD-G-DYKDHD-I-DYKDDDDDDK (cu eticheta finală care codifică un situs de clivaj al enterokinazei). Acesta poate fi fuzionat la extremitatea C-terminală sau N-terminală a unei proteine sau poate fi inserat în cadrul unei proteine. Unii anticorpi disponibili în comerț (de exemplu, M1/4E11) recunosc epitopul numai atunci când acesta este prezent la N-terminal. Cu toate acestea, alți anticorpi disponibili (de exemplu, M2) sunt insensibili la poziție. Reziduul tirozină din FLAG-tag poate fi sulfat, ceea ce poate afecta recunoașterea de către anticorpi a epitopului FLAG. Eticheta FLAG poate fi utilizată împreună cu alte etichete de afinitate, de exemplu o etichetă de polihistidină (His-tag), HA-tag sau myc-tag.

.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.