Fixarea, procesarea și încorporarea optime sunt primii pași critici pentru a permite examinarea histologică a morfologiei țesuturilor și localizarea biomarkerilor în probele de țesut. Îngrijirea în aceste etape inițiale conduce la o mai bună calitate a colorării, imagisticii și analizei moleculare în fazele ulterioare ale fluxului de lucru histologic. Acest articol este o scurtă trecere în revistă a schemelor comune de fixare, procesare și încorporare pentru țesutul de rozătoare FFPE.
Fixare
Fixarea optimă a probelor histologice este esențială pentru conservarea arhitecturii țesutului, inclusiv a celulelor, a componentelor celulare (de exemplu, citoplasmă, nuclee, organite), a materialului extracelular și a componentelor moleculare (de exemplu, proteine, ADN, ARNm). Există multe tipuri diferite de fixatori disponibili, iar fiecare are avantajele și dezavantajele sale în funcție de aplicație. Puteți citi mai multe despre diferiții fixatori de țesuturi utilizând căutarea Talk to Books de pe Google.
Cel mai frecvent fixator utilizat în patologia diagnostică de rutină este formol neutru tamponat 10% (10% NBF). Acest fixator duce de obicei la o bună conservare a țesuturilor; cu toate acestea, pentru a obține cele mai bune rezultate, trebuie să se țină cont de factori precum timpul de fixare, temperatura, pH-ul și grosimea specimenului.
Specimeni: țesutul trebuie tăiat la o grosime de 3 – 5 mm înainte de a fi plasat în fixator.
Volumetru: trebuie să se utilizeze cel puțin o parte de țesut la 20 de părți de fixator. Fixatorul trebuie să fie lipsit de sânge.
Timp: țesuturile se fixează de obicei timp de 24 de ore la temperatura camerei înainte de a fi transformate în ceară de parafină.
Stocare: țesuturile pot fi păstrate în etanol 70% după fixare. Acest lucru nu este recomandat pentru creier sau alte probe neurologice.
Tesuturi precum ochii, plămânii, intestinele și oasele pot necesita fixatori diferiți și/sau o procesare specială, vă rugăm să contactați Reveal Biosciences pentru mai multe informații.
Procesarea țesuturilor
Tesuturile fixate sunt de obicei procesate în ceară de parafină cu ajutorul procesoarelor automate de țesuturi. Prelucrarea automată a țesuturilor presupune scufundarea probelor într-o serie definită de soluții, inclusiv alcooli, xilen și ceară de parafină. Fiecare etapă poate fi personalizată prin controlul timpului, al temperaturii și al presiunii / vidului (P/V) pentru a asigura o bună penetrare a soluției în probe. Histologii noștri au dezvoltat o serie de programe de procesare a țesuturilor, concepute special pentru diferite tipuri de țesuturi.
Încorporare
Încorporarea de înaltă calitate implică orientarea consecventă a tuturor eșantioanelor de același tip de țesut. Probele pot fi încorporate în blocuri într-o varietate de orientări, la cerere; cu toate acestea, urmăm în mod obișnuit orientările Registry of Industrial Toxicology Animal (RITA) și North American Control Animal Database (NACAD) pentru încorporarea țesuturilor de rozătoare. Vă rugăm să vă asigurați că specificați în avans dacă studiul dumneavoastră necesită o orientare diferită de încorporare a țesuturilor și vom fi bucuroși să răspundem solicitării dumneavoastră.
În concluzie, fixarea, prelucrarea și încorporarea optime sunt primii pași critici pentru a permite examinarea morfologiei țesuturilor și localizarea biomarkerilor în probele de țesut. Vă rugăm să ne contactați pentru orice întrebări sau pentru a discuta despre nevoile dumneavoastră de studiu și vom fi bucuroși să vă ajutăm.