Ce este o imunoanaliză în flux lateral?
Există benzi de testare în flux lateral bazate pe principiile imunocromatografiei pentru o gamă largă de analiți țintă. Primele teste au fost realizate pentru detectarea gonadotropinei corionice umane (hCG). În prezent, există teste disponibile în comerț pentru monitorizarea ovulației, detectarea bolilor infecțioase, analiza drogurilor de abuz și măsurarea altor analiți importanți pentru fiziologia umană. De asemenea, au fost introduse produse pentru testare, aplicații agricole, testare de mediu și testare a hranei & pentru animale.
În timp ce primele teste prezentau rezultate calitative bazate pe prezența sau absența unei linii de semnal, proiectarea testelor a progresat spre teste semicantitative și cantitative și spre integrarea cititoarelor portabile.
Un imunoanaliză în flux lateral este descrisă folosind o terminologie variabilă de către diferite sectoare și diferite țări. Denumirile comune includ:
+ Imunoanaliză în flux lateral (LFIA)
+ Test în flux lateral (LFT)
+ Dispozitiv în flux lateral (LFD)
+ Dispozitiv în flux lateral (LFD)
+ Test în flux lateral (LFA)
+ Imunocromatografic în flux lateral. teste
+ Test cu tijă
+ Test rapid
+ Bandă de testare
+ Test rapid
Testele de flux lateral pot fi dezvoltate pentru a fi utilizate în format de tijă sau în casetă. Atât testele cu dipstick, cât și cele cu casetă vor funcționa în mod similar, depinde doar de industrie, de matricea probei și de cerința pieței, care este formatul potrivit.
Formatul sandwich
Formatul de testare sandwich este utilizat de obicei pentru detectarea analiților relativ mari. Dacă analitul are cel puțin două situsuri de legare distincte (adică epitopi), se poate dezvolta un test „sandwich” în care un anticorp pentru un epitop este conjugat cu nanoparticula și un anticorp pentru un alt epitop este imobilizat la linia de testare. Formatul „sandwich” are ca rezultat o intensitate a semnalului care este proporțională cu cantitatea de analit prezentă în probă.
Formatul competitiv
Un format competitiv este utilizat pentru detectarea analiților în care analitul este prea mic pentru ca doi anticorpi să se lege simultan, cum ar fi vitaminele și antibioticele. Într-un test competitiv, linia de testare conține molecula analitului țintă (de obicei un complex proteină-analit). Nanoparticulele sunt conjugate cu un anticorp care recunoaște analitul. În cazul în care analitul nu este prezent în probă, anticorpii conjugați cu nanoparticulele se vor lega de analit la linia de testare, rezultând o intensitate mare a semnalului. Dacă analitul țintă este prezent în eșantion, analitul se va lega de anticorpii de pe suprafața nanoparticulei și va împiedica nanoparticula să se lege la linia de testare. Acest lucru va reduce semnalul la linia de testare, rezultând o intensitate a semnalului care este invers proporțională cu cantitatea de analit prezentă în eșantion.
Tehnologia de imunoanaliză în flux lateral utilizează membrana de nitroceluloză, nanoparticule colorate (sau etichete) și, de obicei, anticorpi, pentru a produce rezultate.
Când se adaugă o probă, proba va curge de-a lungul dispozitivului de testare, trecând prin tamponul conjugat în membrana de nitroceluloză și apoi pe tamponul absorbant.
Figura de mai jos demonstrează cum funcționează un test sandwich:
Schemă de probă: Acționează ca prima etapă a procesului de absorbție și, în unele cazuri, conține un filtru, pentru a asigura un flux precis și controlat al probei.
Cuvă de conjugat: Stochează etichetele și anticorpii conjugați, va primi proba. ajută la eliberarea controlată a conjugatului resolubilizat pe membrana de nitroceluloză.
Membrana de nitroceluloză: Oferă faza solidă ideală pentru imobilizarea reactivilor liniei de testare și de control. Pe măsură ce proba se deplasează de-a lungul dispozitivului, reactivii de legare situați pe membrana de nitroceluloză se vor lega de ținta de pe linia de testare. Se va forma o linie colorată, iar densitatea liniei va varia în funcție de cantitatea de țintă prezentă.
Absorbant pad: Asigură o curgere capilară uniformă prin membrană, absoarbe proba aplicată și previne refluxul.
Matrice de probă
Analiticul țintă și cerințele pieței vor determina tipul de probă care va fi utilizat în analiză.
Câteva probe necesită un tampon de funcționare pentru a ajuta la livrarea probei, de exemplu, hrana pentru animale. Alte probe, cum ar fi sângele, serul, urina sau saliva, pot fi plasate direct pe un test, în timp ce există ocazii în care este necesar un tampon de diluție.
Imunoanalizele cu flux lateral sunt dezvoltate pentru a detecta analiții țintă în matrici de probe care includ:
1. Laptele
2. Sângele integral
3. Serul
4. Saliva
5. Urină
6. Probe de țesut
7. Alimente
8. Băuturi
9. Hrană pentru animale
10. Material vegetal
11. Apă
Tipuri de etichete
În mod obișnuit, testele în flux lateral utilizează nanoparticule de aur conjugate în interiorul tamponului conjugat. Alte etichete includ margele de polistiren colorate, margele magnetice, puncte cuantice sau nanoparticule de conversie ascendentă.
Optimizarea testului va asigura că eticheta interacționează corect cu anticorpul și antigenul pentru a asigura eficiența și acuratețea rezultatelor.
Sesizări multiplexate în flux lateral
Atât testele sandwich cât și cele competitive pot fi dezvoltate pentru a include una sau mai multe linii de testare.
Un test multiplexat poate fi utilizat pentru:
Detectarea mai multor ținte într-un singur test, mai degrabă decât utilizarea mai multor teste individuale. În situațiile în care este disponibil doar un volum mic de probe, un test multiplex vă permite să maximizați utilizarea acestuia;
Pentru a ajuta la diagnosticare atunci când este necesară prezența mai multor markeri împreună;
Confirmarea prezenței mai multor contaminanți în timpul testării unui volum mare de alimente și furaje;
Oferirea de beneficii de economisire a costurilor pentru utilizatorii finali într-un laborator sau pe teren prin testarea simultană a diferitelor ținte;
Zone îndepărtate sau agricole în care resursele sunt limitate și în care testarea multiplexată va economisi timp.
Dispozitive rapide cantitative cu flux lateral
Primele versiuni ale LFD au fost teste predominant calitative. Cu toate acestea, îmbunătățirile aduse reactivilor, materialelor componente și tehnologiilor de citire, împreună cu procesele de fabricație, înseamnă că se pot obține rezultate cantitative.
În plus, evoluțiile în tehnologia de citire și progresele în materie de materii prime, cum ar fi etichetele, înseamnă că un test rapid cu flux lateral poate egala sensibilitatea unui test ELISA.
Avantaje & Dezavantaje ale imunoanalizelor în flux lateral
| Avantaje | Dezavantaje |
| Costuri reduse | Cuantitativ sau semicuantitativcantitativă sau semi-cantitativă |
| O gamă largă de aplicații | Restrângerea volumului total de testare poate impune o limită a sensibilității |
| Tehnologie bine stabilită, ușurința de fabricație | Volumul inexact al probei poate reduce precizia |
| Durată lungă de depozitare, nu este nevoie de refrigerare | Reproductibilitatea de la un test la altul poate fi problematică |
| Simplu, ușor de utilizat | Dificilă miniaturizarea volumului de probă |
| Sensibilitate și specificitate ridicate | Multiplexarea poate fi dificilă |
| Volumet de probă redus necesar | Situație neclară a brevetului în unele cazuri |
| Atestare într-o singură etapă, nu sunt necesare etape de spălare, timp scurt până la rezultat | |
| Timp relativ scurt pentru dezvoltare, timpul de introducere pe piață este redus | |
| Potențial ridicat de comercializare | |
| Facil de scalat | |
| Poate fi integrat cu sisteme de citire | |
| Posibilitatea de multiplexare |
- Avantaje :
Costuri reduse
Gama largă de aplicații
Tehnologie bine stabilită, ușurință de fabricație
Viabilitate îndelungată, nu necesită refrigerare
Operare simplă, ușor de utilizat
Sensibilitate și specificitate ridicate
Volumet de probă redus necesar
Dezvoltare într-o singură etapă, nu sunt necesare etape de spălare, timp scurt până la rezultat
Timp relativ scurt pentru dezvoltare, timpul până la comercializare este redus
Potențial ridicat pentru comercializare
Facil de scalat
Poate fi integrat cu sisteme de citire
Posibilitatea multiplexării - Dezavantaje :
Lectura calitativă sau semicantitativă
Restrângerea volumului total al probei poate impune o limită a sensibilității
Volumul inexact al probei poate reduce precizia
Reproductibilitatea de la probă la probă poate fi problematică
Dificilă miniaturizarea volumului probei
Multiplexarea poate fi dificilă
Situația neclară a brevetului în unele cazuri
.