Optimal fixering, bearbetning och inbäddning är kritiska första steg för att möjliggöra histologisk undersökning av vävnadsmorfologi och lokalisering av biomarkörer i vävnadsprover. Omsorg i dessa inledande skeden leder till högre kvalitet på färgning, avbildning och molekylär analys i senare faser av det histologiska arbetsflödet. Den här artikeln är en kort översikt över vanliga fixerings-, bearbetnings- och inbäddningsscheman för FFPE-vävnad från gnagare.
Fixering
Optimal fixering av histologiska prover är väsentlig för att bevara vävnadsarkitekturen, inklusive celler, cellulära komponenter (dvs. cytoplasma, kärnor, organeller), extracellulärt material och molekylära komponenter (dvs. proteiner, DNA, mRNA). Det finns många olika fixeringsmedel och alla har sina för- och nackdelar beroende på användningsområde. Du kan läsa mer om olika vävnadsfixeringsmedel genom att använda Googles sökning Talk to Books.
Det vanligaste fixeringsmedlet som används i rutinmässig diagnostisk patologi är 10 % neutralt buffrat formalin (10 % NBF). Detta fixeringsmedel ger vanligtvis ett bra vävnadsbevarande, men faktorer som fixeringstid, temperatur, pH-värde och provtjocklek måste beaktas för att uppnå bästa möjliga resultat.
Prover: Vävnad bör trimmas till en tjocklek på 3-5 mm innan den placeras i fixeringsmedel.
Volym: Minst en del vävnad till 20 delar fixeringsmedel bör användas. Fixeringsmedlet ska vara fritt från blod.
Tid: Vävnader fixeras vanligen i 24 timmar i rumstemperatur innan de bearbetas till paraffinvax.
Lagring: Vävnader kan lagras i 70 % etanol efter fixering. Detta rekommenderas inte för hjärnor eller andra neurologiska prover.
Vävnader som ögon, lungor, tarmar och ben kan kräva olika fixeringsmedel och/eller särskild bearbetning, kontakta Reveal Biosciences för mer information.
Vävnadsbearbetning
Fixerade vävnader bearbetas vanligen till paraffinvax med hjälp av automatiserade vävnadsprocessorer. Automatiserad vävnadsbearbetning innebär att proverna sänks ner i en definierad serie lösningar, inklusive alkoholer, xylen och paraffinvax. Varje steg kan anpassas genom att kontrollera tid, temperatur och tryck/vakuum (P/V) för att säkerställa att lösningen tränger in i proverna på ett bra sätt. Våra histologer har utvecklat ett antal vävnadsbehandlingsscheman som är särskilt utformade för olika vävnadstyper.
Inbäddning
En högkvalitativ inbäddning innebär en konsekvent orientering av alla prover av samma vävnadstyp. På begäran kan proverna bäddas in i block i olika riktningar, men vi följer vanligtvis RITA (Registry of Industrial Toxicology Animal) och NACAD (North American Control Animal Database) riktlinjer för inbäddning av vävnader från gnagare. Se till att ange i förväg om din studie kräver en annan orientering för vävnadsinbäddning, så tillgodoser vi gärna din begäran.
Sammanfattningsvis är optimal fixering, bearbetning och inbäddning kritiska första steg för att möjliggöra undersökning av vävnadsmorfologi och lokalisering av biomarkörer i vävnadsprover. Kontakta oss om du har några frågor eller för att diskutera dina undersökningsbehov så hjälper vi dig gärna.