The National Library of Medicine har länge tillhandahållit program och tjänster för professionella medicinska forskare och vårdgivare, inklusive MEDLINE och de olika tjänster som ger tillgång till det, till exempel PubMed och Entrez. På 1990-talet använde fler medlemmar av allmänheten dessa tjänster i takt med att tillgången till Internet blev allmänt utbredd. Icke-professionella användare kunde dock dra nytta av tillförlitlig hälsoinformation i ett format som är tillgängligt för lekmän. National Library of Medicine introducerade MedlinePlus i oktober 1998 för att tillhandahålla en icke-kommersiell onlinetjänst som till exempel liknar den kommersiella WebMD. År 2010 kompletterade en annan tjänst från NCBI, PubMed Health, MedlinePlus genom att erbjuda kuraterad hälsoinformation för konsumenter; PubMed Health fokuserar särskilt på att hitta information om behandlingars kliniska effektivitet.
MedlinePlus erbjöd till en början 22 hälsoteman på engelska, vilket expanderade till nästan 1 000 hälsoteman på engelska och spanska, plus länkar till hälsoinformation på över 40 språk. MedlinePlus erkändes av Medical Library Association för sin roll när det gäller att tillhandahålla hälsoinformation. Webbplatsen fick 84 poäng i American Customer Satisfaction Index för 2010.
På 2000-talet införlivades A.D.A.M:s medicinska uppslagsverk i MedlinePlus. ”Animated Dissection of Anatomy for Medicine, Inc.” är ett NASDAQ-noterat publikt företag med säte i Atlanta, Georgia, som tillhandahåller hälsoinformation för konsumenter och tekniska produkter för förmåner till hälso- och sjukvårdsorganisationer, arbetsgivare, konsumenter och utbildningsinstitutioner.