Syftet med experimentet är att observera amylasenzym i olika miljöer och upptäcka varje miljö genom att hjälpa till med färgförändringar. Enzymer är biologiska molekyler som katalyserar många olika kemiska reaktioner. Med några få undantag är alla enzymer proteiner och varje enzym är specifikt för en viss kemisk reaktion. Enzymer måste ha en specifik tredimensionell struktur för att kunna fungera korrekt. Om ett enzyms struktur förändras (genom värme eller starka kemikalier) kan det hända att det inte fungerar alls. Denna nedbrytning (denaturering) av ett enzyms struktur kan vara dödlig
Om du behöver hjälp med att skriva din uppsats finns vår professionella uppsatsskrivningstjänst här för att hjälpa dig!
Ta reda på mer
Amylasenzym
Amylas, som vanligen finns i saliv och grodda frön. Det katalyserar nedbrytningen av stärkelse. När amylas reagerar med stärkelse skär det av disackariden maltos (två glukosmolekyler som är kopplade till varandra). Allteftersom reaktionen fortskrider kommer mindre stärkelse att finnas kvar och mer socker (maltos) kommer att finnas kvar. amylasets aktivitet kan observeras med hjälp av jod. eftersom jod reagerar med stärkelse och bildar en mörkbrun/lila färg. När amylas bryter ner stärkelse kommer mindre och mindre stärkelse att finnas närvarande och färgen på lösningen (om jod tillsätts) kommer att bli ljusare och ljusare. Färgförändringen observerades med hjälp av spot-plates enligt diagrammet nedan.
Amylasaktivitet observerades under fyra olika behandlingar:
Effekten av temperatur
Effekten av pH
Effekten av substratkoncentration
Effekten av enzymkoncentration
Effekterna av temperatur
Amylas är ett viktigt metaboliskt enzym. Dess funktion är att katalysera hydrolysen av stärkelse till glukos. Vid höga temperaturer blir amylas denaturerat, denaturerat amylas katalyserar inte längre hydrolysen av stärkelse till glukos.
EFFEKTERNA AV pH:
Baserat på dessa resultat, vilket är det optimala pH-värdet för amylas? Är det optimala pH-värdet surt, basiskt/alkaliskt eller neutralt? Varför minskar aktiviteten när pH är för lågt eller för högt?
APPARATUS
-Stärkelse
-Amylas Enzym
-KH2P04
-Na2HP04
-HCI
-Värmare
Bägaren
-Falcon tube
-Spektrofotometer
Jod
Förfarande
1.0,27 g KH2P04 buffertlösning PH 5 bereds med 20 ml
2,0,27 g KH2P04 PH6 bereds med 20 ml
3,0.27g KH2P04 PH7 bereddes med 100ml
4.0.282g Na2HPO4 PH8 bereddes med 20ml
5.0.282g Na2HP04 PH9 bereddes med 20ml
6.20g Stärkelse bereddes också med 50ml kallt vatten
7. För att testa amylasaktivitet med PH-skillnad blandades 5ml stärkelse ,5ml buffert (PH5,6,7,8,9 används vardera) och 1ml amylas med varandra.
8.10min senare lades 0,5ml förberett prov i 5ml HCI.
9.Vid 620nm mättes resultaten på spektrofotometer.
10. Andra delen temperatureffekt,5ml stärkelse,5ml PH7 buffert och 1ml amylas blandades.
11.Det förberedda provet sattes i olika temperaturer 30,50,70 och 90C.
12.10 min senare sattes 5ml HCI i 0,5 ml förberett prov.
13.2-3 min senare tillsattes 5 ml jod i 0,5 ml nytt prov
14.Absorbansen för var och en mättes på spektrofotometer.
OBSERVATIONER
I det här försöket försökte vi skapa olika miljöer för att undersöka enzymaktiviteten hos amylas.Miljöskillnaderna skulle kunna åstadkommas genom PH-skillnader.Därför förberedde vi olika medium med olika pH-värden.K2.Vi fick grafer från våra resultat.En av dem är en graf som relaterar till amylasaktivitet vid olika PH-värden.Den andra är relaterad till amylasaktivitet vid olika temperaturer vid konstant PH-värde.Med K2HPO4 förbereddes PH-värdena 5,6 och 7 och med Na2PO4 8 och 9.Varje förberedelseprocedur tillämpades.5ml stärkelse, 5 ml buffert och 1 ml amylas tillsattes till varandra och man väntade sedan 10 minuter.Efter 10 minuter tillsattes 5 ml HCI till 0,5 ml provblandning.På samma sätt framställdes blandningen för temperaturobservation vid pH 7.Man tillsatte jod i slutet av förfarandet. Absorbansresultaten togs från spektrofotometri.Denna mätning var vid 620nm.
pH buffertprov med amylas
Enligt resultaten,
Den minsta kan man tänka sig som den bästa.Hur mycket enzym som används är mer väsentlig punkt.Om den är mindre betyder det att stärkelsen inte kan användas tillräckligt.En hög mängd stärkelse betyder att komplexmängden också är hög.Den motsatta visar den bästa amylasaktiviteten vid den lägsta koncentrationen.Färgen är ljusare, en mindre absorbans kan anses vara den bästa amylasaktiviteten.
Temperaturprov med amylas
Vid 30C är färgen något orange.
Vid 50C är färgen extra ljus som jodfärg.
Vid 70C är färgen något lila.
Vid 90C är färgen mer lila än vid 30C, som orange-lila.Vid konstant PH är den lilla koncentrationen vid 50C liten, eftersom den lilla absorbansen bildas av ett litet komplex.Det betyder att mängden stärkelse också har minskat.Den bästa aktiviteten är 50C vid konstant PH.
Våra akademiska experter är redo och väntar på att hjälpa dig med alla skrivprojekt du kan ha. Från enkla uppsatsplaner till fullständiga avhandlingar kan du garantera att vi har en tjänst som är perfekt anpassad till dina behov.
Visa våra tjänster
RESULTAT
Vårt mål är att vara relaterat till amylasets aktivitet För att detektera det har vi förberett olika PH från KHP04 och Na2HP04 genom att tillsätta syra eller bas. Användningen av båda är relaterad till buffertintervallet.Efter beredningen av bufferten mäter vi absorbansen med spektrofotometri.Vid olika PH ger absorbansen också olika koncentration.Om koncentrationen av amylasenzym i provet är liten, betyder det att enzymet som används i komplexet är mindre, så att aktiviteten hos enzymet är den bästa.Vid olika PH är den minsta koncentrationen vid PH 7.Sedan utförde vi den andra delen av försöket genom att använda PH7.Valet av PH7 är relaterat till observationen av den bästa amylasaktiviteten i den första delen.Vid PH7 tog vi prov med amylasenzymkoncentration vid olika PHs.Den minsta koncentrationen är vid 50C i den andra delen.Koncentrationen är 0,006.Färgen är ljusare som jodfärg.Stärkelse används tillsammans med amylas och därför är den komplexa färgen också ljusare.Amylasenzymaktiviteten är bäst vid 50C.Denna mätning görs vid 620nm.
DISKUSSION OCH SLUTSATS
Varför mäts den vid 620nm? Varför används HCI som preparat? Vad betyder ljus färg?Hur påverkar mer värme rxn? Under experimentet vill vi klargöra experimentets syfte genom att besvara dessa frågor.I detta experiment har vi undersökt effekten av olika buffertar och temperaturer.Vi har förberett buffertar med olika PH-värden.KH2P04 har förberetts för PH-värdena 5, 6, 7 och Na2HP04 för 8 och 9.I den första delen mättes provet med amylaskoncentrationen vid konstant temperatur (rumstemperatur).Vid PH 7 mättes den minsta koncentrationen.Liten koncentration betyder mindre komplex mindre stärkelse och enzym används enzymaktivitet är hög.Vårt resultat från mätningen vid PH 7 är 0,026.I den andra delen ändrades konstant PH, temperatur och sedan observerades effekten av det.Vid 50 C hittades den minsta absorbansen (0,0060) och färgen var extra ljus. det betyder att det finns färre komplex. i detta experiment används jod för att upptäcka stärkelsemolekyler genom att observera färgförändringen. jod och stärkelse kombinerades och bildade sedan ett komplex. en annan punkt är varför HCI används.Syran stoppar den enzymatiska reaktionen och jod reagerar med stärkelse för att producera blå färg. enzymets aktivitet är också väsentlig. det kan användas för denatureringsdetektion. stärkelse reagerar med jod som är gult för att bilda en blå förening Amax=620nm. intensiteten av den blåa färgen kan kvantifieras spektrofotometriskt genom att mäta dess absorbans vid 620nm.