La fijación, el procesamiento y la incrustación óptimos son los primeros pasos críticos para permitir el examen histológico de la morfología del tejido y la localización de biomarcadores en las muestras de tejido. El cuidado en estas etapas iniciales conduce a una mayor calidad de tinción, imagen y análisis molecular en las fases posteriores del flujo de trabajo de la histología. Este artículo es un breve resumen de los esquemas comunes de fijación, procesamiento e incrustación de tejidos de roedores FFPE.
Fijación
La fijación óptima de las muestras histológicas es esencial para la preservación de la arquitectura de los tejidos, incluyendo las células, los componentes celulares (es decir, citoplasma, núcleos, orgánulos), el material extracelular y los componentes moleculares (es decir, proteínas, ADN, ARNm). Hay muchos fijadores diferentes disponibles, y cada uno tiene sus ventajas y desventajas dependiendo de la aplicación. Puede leer más sobre los diferentes fijadores de tejidos utilizando la búsqueda de Google Talk to Books.
El fijador más comúnmente utilizado en la patología diagnóstica de rutina es la Formalina Neutral Tamponada al 10% (10% NBF). Este fijador suele dar lugar a una buena conservación de los tejidos; sin embargo, hay que tener en cuenta factores como el tiempo de fijación, la temperatura, el pH y el grosor de la muestra para conseguir los mejores resultados.
Especímenes: el tejido debe recortarse a un grosor de 3 – 5 mm antes de colocarlo en el fijador.
Volumen: debe utilizarse al menos una parte de tejido por cada 20 partes de fijador. El fijador debe estar libre de sangre.
Tiempo: los tejidos suelen fijarse durante 24 horas a temperatura ambiente antes de procesarlos en parafina.
Almacenamiento: los tejidos pueden almacenarse en etanol al 70% después de la fijación. Esto no se recomienda para el cerebro u otras muestras neurológicas.
Tejidos como los ojos, los pulmones, los intestinos y los huesos pueden requerir diferentes fijadores y/o un procesamiento especial; póngase en contacto con Reveal Biosciences para obtener más información.
Procesamiento de tejidos
Los tejidos fijados se procesan normalmente en cera de parafina utilizando procesadores de tejidos automatizados. El procesamiento automatizado de tejidos implica la inmersión de las muestras en una serie definida de soluciones que incluyen alcoholes, xileno y cera de parafina. Cada paso puede personalizarse controlando el tiempo, la temperatura y la presión/vacío (P/V) para garantizar una buena penetración de la solución en las muestras. Nuestros histólogos han desarrollado una serie de programas de procesamiento de tejidos diseñados específicamente para diferentes tipos de tejidos.
Incorporación
La incrustación de alta calidad implica la orientación consistente de todas las muestras del mismo tipo de tejido. Las muestras se pueden incrustar en bloques en una variedad de orientaciones a petición; sin embargo, normalmente seguimos las Directrices del Registro de Animales de Toxicología Industrial (RITA) y de la Base de Datos Norteamericana de Animales de Control (NACAD) para la incrustación de tejidos de roedores. Por favor, asegúrese de especificar por adelantado si su estudio requiere una orientación de incrustación de tejido diferente y estaremos encantados de atender su solicitud.
En resumen, la fijación, el procesamiento y la incrustación óptimos son los primeros pasos críticos para permitir el examen de la morfología del tejido y la localización de biomarcadores en muestras de tejido. Por favor, póngase en contacto con nosotros con cualquier pregunta o para discutir sus necesidades de estudio y estaremos encantados de ayudarle.