[4] Porovnání rozšířeného zeleného fluorescenčního proteinu a jeho destabilizované formy jako reportérů transkripce

Tato kapitola popisuje využití zeleného fluorescenčního proteinu (GFP) jako reportérového genu při studiu genové exprese. GFP vyzařuje fluorescenční světlo při excitaci bez přídavku substrátu nebo kofaktoru, a to jak in vivo, tak in vitro. Fluorescenční aktivitu GFP lze detekovat pomocí fluorescenčního mikroskopu, fluorometru, přístroje pro fluorescenčně aktivované třídění buněk (FACS) nebo zobrazovací čtečky mikrodestiček. Vylepšený GFP (EGFP) je mutant GFP s jasnější fluorescencí, díky které je detekce mnohem citlivější. Použití GFP jako reportérového genu nabízí řadu výhod. Patří mezi ně analýza v reálném čase, minimální manipulace se vzorkem, možnost analýzy velkého množství a vysoká citlivost. GFP je však stabilní protein, takže se po expresi v buňkách snadno hromadí. Tato akumulace způsobuje, že indukovatelná exprese reportéru je necitlivá na jakoukoli změnu indukce, a proto by ji bylo obtížné použít ve studiích kinetiky. Tato kapitola pojednává o užitečnosti EGFP a destabilizovaného EGFP (dEGFP) jako transkripčních reportérů jejich spojením s NF-KB vazebnou sekvencí a promotorem thyminkinázy (TK) a porovnáním rozdílu v expresi mezi EGFP a dEGFP. Uvádí, že EGFP i dEGFP lze použít jako reportéry ve studiích transkripce. Také dEGFP je citlivější v reakci na změny v léčbě tumor nekrotizujícím faktorem (TNF) díky své rychlejší rychlosti obratu.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.