Účelem experimentu je pozorovat enzym amylázu v různých prostředích a detekovat jednotlivá prostředí pomocí barevných změn. Enzymy jsou biologické molekuly, které katalyzují mnoho různých chemických reakcí. Až na několik výjimek jsou všechny enzymy bílkoviny a každý enzym je specifický pro určitou chemickou reakci. Enzymy si musí zachovat specifickou trojrozměrnou strukturu, aby mohly správně fungovat. Pokud se struktura enzymu změní (působením tepla nebo agresivních chemických látek), nemusí vůbec fungovat. Toto narušení (denaturace) struktury enzymu může být fatální
Potřebujete-li pomoc s napsáním eseje, naše profesionální služba psaní esejí je tu pro vás!
Zjistěte více
Enyzym amyláza
Amyláza, která se běžně nachází ve slinách a klíčících semenech. Katalyzuje rozklad škrobu. Při reakci amylázy se škrobem dochází k odštěpení disacharidu maltózy (dvě spojené molekuly glukózy). V průběhu reakce bude přítomno méně škrobu a více cukru (maltózy). aktivitu amylázy lze pozorovat pomocí jódu. jód totiž reaguje se škrobem za vzniku tmavě hnědé/fialové barvy. Jak amyláza rozkládá škrob, bude přítomno stále méně a méně škrobu a barva roztoku (je-li přidán jód) bude stále světlejší a světlejší. Změna barvy byla pozorována pomocí bodových destiček, jak je znázorněno na obrázku níže.
Amylasová aktivita byla pozorována při čtyřech různých ošetřeních:
vliv teploty
vliv pH
vliv koncentrace substrátu
vliv koncentrace enzymu
Vliv teploty
Amylasa je důležitý metabolický enzym. Její funkcí je katalyzovat hydrolýzu škrobu na glukózu. Při vysokých teplotách se amyláza denaturuje, denaturovaná amyláza již nekatalyzuje hydrolýzu škrobu na glukózu.
Vliv pH:
Jaké je na základě těchto výsledků optimální pH pro amylázu? Je toto optimální pH považováno za kyselé, zásadité/alkalické nebo neutrální? Proč se aktivita snižuje, když je pH příliš nízké nebo příliš vysoké?
APPARATUS
-Skrob
-Amyláza enzym
-KH2P04
-Na2HP04
-HCI
–
-.Topné těleso
-Beaker
-Falconova zkumavka
-Spektrofotometr
-Jod
PŘÍPRAVA
1.Připravilo se 0,27 g pufrovacího roztoku KH2P04 PH 5 s 20 ml
2.Připravilo se 0,27 g KH2P04 PH6 s 20 ml
3.27g KH2P04 PH7 byl připraven se 100ml
4,0.282g Na2HPO4 PH8 byl připraven s 20ml
5,0.282g Na2HP04 PH9 byl připraven s 20ml
6,20g Škrobu byl připraven také s 50ml studené vody
7. PH8 byl připraven s 20ml
5,0.282g Na2HP04. Pro testování aktivity amylázy s rozdílem PH bylo vzájemně smícháno 5ml škrobu, 5ml pufru (použito vždy PH5,6,7,8,9) a 1ml amylázy.
8.Po 10minutách bylo 0,5ml připraveného vzorku vloženo do 5ml HCI.
9.Při 620nm byly výsledky změřeny na spektrofotometru.
10.Po 10minutách bylo 0,5ml vzorku vloženo do 5ml HCI. Druhá část teplotního efektu,5ml škrobu,5ml PH7 pufru a 1ml amylázy byly smíchány.
11.Připravený vzorek byl vložen do různých teplot 30,50,70 a 90C.
12.Po 10 minutách bylo do 0,5ml připraveného vzorku vloženo 5ml HCI.
13.Po 10 minutách bylo do 0,5ml připraveného vzorku vloženo 5ml HCI.O 2-3 min později bylo do 0,5 ml nového vzorku přidáno 5 ml jódu
14. Absorbance každého z nich byla změřena na spektrofotometru.
OBSAHY
V tomto experimentu jsme se snažili vytvořit různé prostředí pro zkoumání aktivity enzymu amylasy.Rozdíly v prostředí by mohly být zajištěny rozdíly v PH.Proto jsme připravili různá média i s různými pH.K2.Z našich výsledků jsme získali grafy.Jeden z nich je graf, který se týká aktivity amylázy při různých PH.Druhý se týká aktivity amylázy při různých teplotách při konstantním PH.S K2HPO4 bylo připraveno PH 5,6a 7 a s Na2PO4 8a 9.Každý postup přípravy byl použit.5ml škrobu, 5 ml pufru, 1 ml amylasy a pak se čekalo 10 min.Po 10 min se do 0,5 ml směsi vzorků přidalo 5 ml HCI.Stejným způsobem se připravila směs pro sledování teploty pH 7 a na závěr se přidal jód. Výsledky absorbancí byly získány ze spektrofotometrie. toto měření probíhalo při 620 nm.
vzorek pH pufru s amylasou
Podle výsledků,
za nejlepší lze považovat ten nejmenší. podstatnější je, kolik enzymu se použije.Pokud je to méně, znamená to, že škrob nemůže být dostatečně využit. vysoké množství škrobu znamená, že množství komplexu je také vysoké. opačný ukazuje nejlepší aktivitu amylasy při nejmenší koncentraci. barva je světlejší, menší absorbance by mohla být považována za nejlepší aktivitu amylasy.
Teplotní vzorek s amylasou
Při 30C je barva mírně oranžová.
Při 50C je barva extra světlá jako jodová.
Při 70C je barva mírně fialová.
Při 90C je barva více fialová než při 30C jako oranžovofialová. při konstantním PH, malé koncentraci, při 50C. protože malá absorbance tvořená malým komplexem. to znamená, že množství škrobu se také snížilo. nejlepší aktivita je 50C při konstantním PH.
Naši akademičtí odborníci jsou připraveni a čekají na pomoc s jakýmkoli vaším písemným projektem. Od jednoduchých esejistických plánů až po kompletní disertační práce, můžete si být jisti, že máme služby dokonale přizpůsobené vašim potřebám.
Zobrazit naše služby
VÝSLEDKY
Naším cílem je, aby se vztahovaly k aktivitě amylázy. k jejímu zjištění jsme připravili různé PH z KHP04 a Na2HP04 přidáním kyseliny nebo zásady. Po přípravě pufru jsme změřili absorbanci při spektrofotometrii.Při různých PH absorbance udává také různou koncentraci.Pokud je koncentrace enzymu amylasy se vzorkem malá, znamená to, že použitý komplex enzymu je menší, takže aktivita ezymu je tam nejlepší.Při různých PH je nejmenší koncentrace při PH 7.A pak jsme provedli druhou část experimentu pomocí PH7.Zvolená PH7 souvisí s pozorováním nejlepší aktivity amylázy v první části.Při PH7 jsme odebrali vzorek s koncentrací enzymu amylázy při různých PH.Nejmenší koncentrace je při 50C v druhé části.Koncentrace je 0,006.Barva je světlejší jako jodová.Škrob je použit s amylasou, a proto je i barva komplexu světlejší.Aktivita enzymu amylasy je nejlepší při 50C.Toto měření se provádí při 620nm.
DISKUSE A ZÁVĚR
Proč se měří při 620nm ? Proč se k přípravě používá HCI ? Co znamená barva světla Jak ovlivňuje větší teplo rxn ? Během experimentu chceme odpovědí na tyto otázky rozlišit účel experimentu.V tomto experimentu jsme se zabývali vlivem různých pufrů a teploty.Připravili jsme pufry s různým PH.KH2P04 byl připraven pro PH 5,6,7a Na2HP04 pro 8a 9.V první části , při konstantní teplotě (pokojová teplota) byl změřen vzorek s koncentrací amylázy.Při PH 7,jsme měřili nejmenší.malá koncentrace znamená menší komplex méně škrobu a enzym se používá enzymová aktivita je vysoká.náš výsledek z měření při PH 7 je 0,026.Jako druhá část ,konstantní PH,teplota byla změněna a pak pozorován její vliv.Při teplotě 50 C byla zjištěna nejmenší absorbance ( 0,0060 ) a barva byla navíc světlá.To znamená, že je zde méně komplexu.V tomto pokusu se používá jód k detekci molekul škrobu pozorováním změny barvy.Jód a škrob se spojily a pak vytvořily komplex.Dalším bodem je, proč se používá HCI.Kyselina zastaví enzymatickou reakci a jód reaguje se škrobem za vzniku modré barvy. aktivita enzymu je také podstatná. lze ji použít k detekci denaturace. škrob reaguje s jódem, který je žlutý, za vzniku modré sloučeniny Amax=620nm. intenzitu modré barvy lze kvantifikovat spektrofotometricky měřením její absorbance při 620nm.
.