[4] Parannetun vihreän fluoresoivan proteiinin ja sen destabiloidun muodon vertailu transkription raportoijina

Tässä luvussa kuvataan vihreän fluoresoivan proteiinin (GFP) käyttökelpoisuutta raportoijageeninä geeniekspression tutkimuksessa. GFP emittoi fluoresoivaa valoa herätettäessä ilman substraatin tai kofaktorin lisäämistä sekä in vivo että in vitro. GFP:n fluoresenssiaktiivisuus voidaan havaita fluoresenssimikroskoopilla, fluorometrillä, fluoresenssiaktivoidulla solujen lajittelulaitteella (FACS) tai kuvantamismikrolevylukijalla. Tehostettu GFP (EGFP) on GFP-mutantti, jonka fluoresenssi on kirkkaampi ja joka tekee havaitsemisesta paljon herkempää. GFP:n käyttö reportterigeeninä tarjoaa useita etuja. Näitä ovat muun muassa reaaliaikainen analyysi, minimaalinen näytteen käsittely, mahdollisuus analysoida suuria määriä ja suuri herkkyys. GFP on kuitenkin stabiili proteiini, joten se kertyy helposti, kun se ilmentyy soluissa. Kertyminen tekee reportterin indusoitavasta ilmentymisestä epäherkkää induktiossa tapahtuville muutoksille, joten sitä olisi vaikea käyttää kinetiikkatutkimuksissa. Tässä luvussa käsitellään EGFP:n ja destabiloidun EGFP:n (dEGFP) käyttökelpoisuutta transkriptioreporttereina fuusioimalla ne NF-KB:tä sitovaan sekvenssiin ja tymikliinikinaasin (TK) promoottoriin ja vertailemalla EGFP:n ja dEGFP:n ilmentymisen eroja. Siinä keskustellaan siitä, että sekä EGFP:tä että dEGFP:tä voidaan käyttää raportoijina transkriptiotutkimuksissa. Lisäksi dEGFP on herkempi reagoimaan muutoksiin tuumorinekroositekijän (TNF) hoidossa sen nopeamman vaihtumisnopeuden vuoksi.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.