Kokeen tarkoituksena on havainnoida amylaasientsyymiä eri ympäristöissä ja havaita kunkin ympäristön värimuutokset. Entsyymit ovat biologisia molekyylejä, jotka katalysoivat monia erilaisia kemiallisia reaktioita. Muutamaa poikkeusta lukuun ottamatta kaikki entsyymit ovat proteiineja, ja jokainen entsyymi on spesifinen tiettyyn kemialliseen reaktioon. Entsyymien on säilytettävä tietty kolmiulotteinen rakenne toimiakseen oikein. Jos entsyymin rakenne muuttuu (kuumuuden tai voimakkaiden kemikaalien vaikutuksesta), se ei välttämättä toimi lainkaan. Tämä entsyymin rakenteen hajoaminen (denaturoituminen) voi olla kohtalokasta
Jos tarvitset apua esseen kirjoittamiseen, ammattitaitoinen esseekirjoituspalvelumme auttaa!
Lue lisää
Amylaasientsyymi
Amylaasia esiintyy yleisesti syljessä ja siementen itämisessä. Se katalysoi tärkkelyksen hajoamista. Kun amylaasi reagoi tärkkelyksen kanssa, se katkaisee disakkaridimaltoosin (kaksi toisiinsa sidottua glukoosimolekyyliä). Reaktion edetessä tärkkelystä on vähemmän ja sokeria (maltoosia) enemmän.Amylaasin aktiivisuus voidaan havaita jodin avulla.Koska jodi reagoi tärkkelyksen kanssa muodostaen tummanruskean/violetin värin. Kun amylaasi hajottaa tärkkelystä, tärkkelystä on yhä vähemmän ja liuoksen väri (jos jodia on lisätty) muuttuu yhä vaaleammaksi. Värimuutosta havainnoitiin spot-levyjen avulla alla olevan kuvan mukaisesti.
Amylaasin aktiivisuutta havainnoitiin neljällä eri käsittelyllä:
Lämpötilan vaikutus
PH:n vaikutus
Substraattikonsentraation vaikutus
entsyymikonsentraation vaikutus
Lämpötilan vaikutus
Amylaasi on tärkeä aineenvaihdunta-arvojen kannalta tärkeä entsyymi. Sen tehtävänä on katalysoida tärkkelyksen hydrolyysi glukoosiksi. Korkeissa lämpötiloissa amylaasi denaturoituu, denaturoitu amylaasi ei enää katalysoi tärkkelyksen hydrolyysiä glukoosiksi.
PH:n VAIKUTUS:
Mikä on näiden tulosten perusteella optimaalinen pH amylaasille? Pidetäänkö tätä optimaalista pH:ta happamana, emäksisenä/emäksisenä vai neutraalina? Miksi aktiivisuus vähenee, kun pH on liian alhainen tai liian korkea?
APPARATUS
-Tärkkelys
-Amylaasientsyymi
-KH2P04
-Na2HP04
-HCI
-Lämmitin
-Beaker
-Falcon-putki
-spektrofotometri
-jodi
MENETELMÄ
1.0,27 g KH2P04 puskuriliuosta PH 5 valmistettiin 20ml
2.0,27 g KH2P04 PH6 valmistettiin 20ml
3.0.27g KH2P04 PH7 valmistettiin 100ml
4.0.282g Na2HPO4 PH8 valmistettiin 20ml
5.0.282g Na2HP04 PH9 valmistettiin 20ml
6.20g Tärkkelystä valmistettiin myös 50ml kylmää vettä
7. Amylaasiaktiivisuuden testaamiseksi PH-erolla sekoitettiin keskenään 5ml tärkkelystä ,5ml puskuria (PH5,6,7,8,9 käytetään kutakin) ja 1ml amylaasia.
8.10min myöhemmin 0.5ml valmistettua näytettä laitettiin 5ml HCI:hen.
9.620nm:n kohdalla mitattiin tulokset spektrofotometrillä.
10. Toisen osan lämpötilavaikutus,5ml tärkkelystä,5ml PH7 puskuria ja 1ml amylaasia sekoitettiin.
11.Valmistettu näyte laitettiin eri lämpötiloihin 30,50,70 ja 90C.
12.10 min myöhemmin,5ml HCI:tä laitettiin 0,5 ml:aan valmistettua näytettä.
13.2-3 min myöhemmin,5ml jodia lisättiin 0,5ml uuteen näytteeseen
14.Absorbanssi mitattiin spektrofotometrillä.
HAVAINNOT
Tässä kokeessa yritimme luoda erilaisia ympäristöjä amylaasientsyymin aktiivisuuden tutkimiseksi.Ympäristöerot voitaisiin tarjota PH-eroilla.Siksi valmistimme erilaisia väliaineita myös eri pH-arvoilla.K2.Tuloksistamme saatiin kuvaaja.Yksi niistä on kuvaaja, joka liittyy amylaasiaktiivisuuteen eri PH-arvoilla.Toinen liittyy amylaasiaktiivisuuteen eri lämpötiloissa vakiolla PH-arvolla.K2HPO4:lla valmistettiin PH-arvot 5,6 ja 7 ja Na2PO4:lla 8 ja 9.Jokaista valmistusmenetelmää sovellettiin.5ml tärkkelystä, 5 ml puskuria, 1 ml amylaasia lisättiin toisiinsa ja sitten odotettiin 10 minuuttia. 10 minuutin kuluttua 0,5 ml:aan näyteseosta lisättiin 5 ml HCI:tä.Samalla tavalla valmistettiin seos lämpötilan havainnointia varten PH 7 ja lisättiin jodia menettelyn loppuun. Absorbanssitulokset otettiin spektrofotometriasta.Tämä mittaus oli 620nm.
pH puskurinäyte amylaasilla
Tulosten mukaan,
Vähäisintä voidaan pitää parhaana.Kuinka paljon entsyymiä käytetään on oleellisempi seikka.Jos se on vähemmän, se tarkoittaa, että tärkkelystä ei voida käyttää riittävästi.Suuri tärkkelyksen määrä tarkoittaa, että kompleksin määrä on myös suuri.Vastakkainen osoittaa parhaan amylaasiaktiivisuuden pienimmällä konsentraatiolla.Väri on vaaleampi, pienempää absorbanssia voidaan pitää parhaana amylaasiaktiivisuutena.
Lämpötilanäyte amylaasilla
30C:ssa väri on hieman oranssi.
50C:ssa väri on erittäin vaalea kuten jodin väri.
70C:ssa väri on hieman violetti.
90C:ssa väri on enemmän violetti kuin 30C:ssa, kuten oranssi-violetti.Vakiossa PH:ssa ,pieni konsentraatio ,50C:ssa.Koska pieni absorbanssi muodostuu pienestä kompleksista.Se tarkoittaa, että tärkkelyksen määrä on myös vähentynyt.Paras aktiivisuus on 50C:ssa vakio PH:ssa.
Akateemiset asiantuntijamme ovat valmiina auttamaan minkä tahansa kirjoitusprojektin kanssa. Yksinkertaisista esseesuunnitelmista aina täydellisiin väitöskirjoihin asti, voit taata, että meillä on täydellisesti tarpeisiisi sopiva palvelu.
Katso palvelumme
TULOKSET
Tavoitteenamme on liittyä amylaasin aktiivisuuteen.sen havaitsemiseksi valmistimme KHP04:stä ja Na2HP04:stä erilaisia PH-arvoja lisäämällä happoa tai emästä. Molempien käyttö liittyy puskuriväliin.Puskurin valmistuksen jälkeen mittaamme absorbanssin spektrofotometrialla.Eri PH-arvoilla absorbanssi antaa myös erilaisen konsentraation.Jos amylaasientsyymin konsentraatio näytteessä on pieni, se tarkoittaa, että käytetyn entsyymin kompleksi on pienempikokoinen, joten entsyymin aktiivisuus on paras.Eri PH-arvoilla pienin konsentraatio on PH-arvolla 7.Sen jälkeen teimme kokeen toisen osan PH7:ää käyttäen.PH7:n valinta liittyy parhaaseen amylaasiaktiivisuuteen ensimmäisessä osassa.PH7:ssä otimme näytteen amylaasientsyymin konsentraation kanssa eri PH-arvoilla.Pienin konsentraatio on 50C:ssa toisessa osassa.Konsentraatio on 0,006.Väri on vaaleampi kuin jodin väri.Tärkkelystä käytetään amylaasin kanssa ja siksi kompleksin väri on myös vaaleampi.Amylaasientsyymin aktiivisuus on paras 50C:ssa.Tämä mittaus tehdään 620nm:ssä.
KESKUSTELU JA PÄÄTELMÄT
Miksi mitataan 620nm:ssä? Miksi valmistuksessa käytetään HCI:tä ? Mitä tarkoittaa vaalea väri?Miten enemmän lämpöä vaikuttaa rxn? Kokeessa haluamme selvittää kokeen tarkoituksen vastaamalla näihin kysymyksiin.Tässä kokeessa tutkimme eri puskurien ja lämpötilojen vaikutusta.Valmistimme puskureita eri PH-arvoilla.KH2P04 valmistettiin PH-arvoille 5,6,7 ja Na2HP04 arvoille 8 ja 9.Ensimmäisessä osassa mitattiin vakiolämpötilassa (huoneenlämpötila) näyte, jossa oli amylaasipitoisuus.PH 7:ssä mitattiin pienin konsentraatio.Pieni konsentraatio tarkoittaa vähemmän kompleksia vähemmän tärkkelystä ja entsyymiä käytetään entsyymin aktiivisuus on korkea.Mittaustuloksemme PH 7:ssä on 0,026.Toisessa osassa vakio PH:ta ja lämpötilaa muutettiin ja sen jälkeen havainnoitiin sen vaikutusta.Lämpötilan ollessa 50 C havaittiin pienin absorbanssi (0,0060) ja väri oli erittäin vaalea.Se tarkoittaa, että kompleksia on vähemmän.Tässä kokeessa jodia käytetään tärkkelysmolekyylien havaitsemiseen värinmuutoksen avulla.Jodi ja tärkkelys yhdistyivät ja muodostivat kompleksin.Toinen asia on, miksi HCI:tä käytetään.Happo pysäyttää entsymaattisen reaktion ja jodi reagoi tärkkelyksen kanssa muodostaen sinisen värin.Entsyymin aktiivisuus on myös olennaista.Sitä voidaan käyttää denaturaation havaitsemiseen.Tärkkelys reagoi keltaisen jodin kanssa muodostaen sinisen yhdisteen Amax=620nm.Sinisen värin voimakkuus voidaan kvantifioida spektrofotometrisesti mittaamalla absorbanssi 620nm:ssä.