Le but de l’expérience est d’observer l’enzyme amylase dans différents environnements et de détecter de chaque environnement en aidant les changements de couleur. Les enzymes sont des molécules biologiques qui catalysent de nombreuses réactions chimiques différentes. À quelques exceptions près, toutes les enzymes sont des protéines et chaque enzyme est spécifique à une certaine réaction chimique. Les enzymes doivent conserver une structure tridimensionnelle spécifique afin de fonctionner correctement. Si la structure d’une enzyme est altérée (par la chaleur ou des produits chimiques agressifs), elle peut ne plus fonctionner du tout. Cette dégradation (dénaturation) de la structure d’une enzyme peut être fatale
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Enzyme amylase
L’amylase, que l’on trouve couramment dans la salive et les graines en germination. Elle catalyse la dégradation de l’amidon. Lorsque l’amylase réagit avec l’amidon, elle coupe le disaccharide maltose (deux molécules de glucose liées ensemble). Au fur et à mesure que la réaction progresse, il y a moins d’amidon et plus de sucre (maltose).L’activité de l’amylase peut être observée en utilisant de l’iode.Car l’iode réagit avec l’amidon pour former une couleur brun foncé/violet. Au fur et à mesure que l’amylase décompose l’amidon, de moins en moins d’amidon sera présent et la couleur de la solution (si de l’iode est ajouté) deviendra de plus en plus claire. Le changement de couleur a été observé à l’aide de plaques de spots comme illustré sur le schéma ci-dessous.
L’activité de l’amylase a été observée sous quatre traitements différents :
effet de la température
effet du pH
effet de la concentration en substrat
effet de la concentration en enzyme
Les effets de la température
L’amylase est une enzyme métabolique importante. Sa fonction est de catalyser l’hydrolyse de l’amidon en glucose. A haute température, l’amylase se dénature, l’amylase dénaturée ne catalyse plus l’hydrolyse de l’amidon en glucose.
EFFET DU pH :
Sur la base de ces résultats, quel est le pH optimal pour l’amylase ? Ce pH optimal est-il considéré comme acide, basique/alcalin ou neutre ? Pourquoi l’activité diminue-t-elle lorsque le pH est trop faible ou trop élevé ?
APPARATUS
-Amidon
-Amylase Enzyme
-KH2P04
-Na2HP04
-HCI
-Chauffage
-Bécher
-Tube Falcon
-Spectrophotomètre
-Iode
PROCÉDURE
1.0,27 g de solution tampon KH2P04 PH 5 a été préparé avec 20ml
2.0.27g de KH2P04 PH6 a été préparé avec 20ml
3.0.27g KH2P04 PH7 a été préparé avec 100ml
4.0.282g Na2HPO4 PH8 a été préparé avec 20ml
5.0.282g Na2HP04 PH9 a été préparé avec 20ml
6.20g L’amidon a également été préparé avec 50ml d’eau froide
7. Pour tester l’activité de l’amylase avec la différence de PH,5ml d’amidon ,5ml de tampon(PH5,6,7,8,9 est utilisé chacun) et 1ml d’amylase ont été mélangés les uns aux autres.
8.10min plus tard,0,5ml d’échantillon préparé a été mis dans 5ml de HCI.
9.A 620nm ,les résultats ont été mesurés au spectrophotomètre.
10. Deuxième partie effet de température,5ml d’amidon ,5ml de tampon PH7 et 1ml d’amylase ont été mélangés.
11.L’échantillon préparé a été mis à différentes températures 30,50,70 et 90C.
12.10 min plus tard,5ml de HCI a été mis dans 0,5 ml d’échantillon préparé.
13.2-3 min plus tard,5ml d’iode a été ajouté dans 0,5ml de nouvel échantillon
14.L’absorbance de chacun a été mesurée au spectrophotomètre.
OBSERVATIONS
Dans cette expérience, nous avons essayé de créer un environnement différent pour examiner l’activité de l’enzyme amylase.Les différences d’environnement pourraient être fournies par des différences de PH. Par conséquent, nous avons préparé différents milieux également à différents pH. K2. Le graphique a été obtenu à partir de nos résultats. L’un d’eux est un graphique qui se rapporte à l’activité de l’amylase à différents PH. L’autre est relatif à l’activité de l’amylase à différentes températures à PH constant. Avec K2HPO4, on a préparé des PH 5,6 et 7 et avec Na2PO4 8 et 9. Chaque procédure de préparation a été appliquée. 5ml d’amidon, 5ml de tampon et 1ml d’amylase ont été ajoutés les uns aux autres et ont attendu 10 minutes. Après 10 minutes, 5ml de HCI ont été ajoutés à 0,5 ml de mélange d’échantillons. De la même manière, le mélange pour l’observation de la température a été préparé à pH 7 et de l’iode a été ajouté à la fin de la procédure. Les résultats de l’absorbance ont été pris à partir de la spectrophotométrie.Cette mesure était à 620nm.
pH tampon échantillon avec amylase
Selon les résultats,
Le plus petit peut être considéré comme un meilleur.La quantité d’enzyme utilisée est un point plus essentiel.Si c’est moins un ,cela signifie que l’amidon ne peut pas être utilisé de manière adéquate.Une quantité élevée d’amidon signifie que la quantité de complexe est également élevée.Le contraire montre la meilleure activité amylase à la plus petite concentration.La couleur est plus claire,une plus petite absorbance pourrait être pensée comme une meilleure activité amylase.
Échantillon de température avec amylase
À 30C la couleur est légèrement orange.
À 50C la couleur est extra claire comme la couleur de l’iode.
À 70C la couleur est légèrement violette.
À 90C la couleur est plus violette qu’à 30C une comme l’orange-violet.À PH constant ,la petite concentration ,à 50C.Parce que la petite absorbance formée par le petit complexe.Cela signifie que la quantité d’amidon a été diminuée aussi.La meilleure activité est 50C à PH constant.
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RESULTATS
Notre objectif est d’être lié à l’activité de l’amylase.Pour la détecter, nous avons préparé différents PH de KHP04 et Na2HP04 en ajoutant de l’acide ou de la base. L’utilisation des deux est liée à l’intervalle du tampon. Après la préparation du tampon, nous mesurons l’absorbance à la spectrophotométrie. À différents PH, l’absorbance donne également une concentration différente. Si la concentration de l’enzyme amylase avec l’échantillon est petite, cela signifie que l’enzyme utilisée est plus petite et que l’activité de l’enzyme est la meilleure. À différents PH, la plus petite concentration est à PH 7. Et puis nous avons fait la deuxième partie de l’expérience en utilisant PH7.Le choix du PH7 est lié à l’observation de la meilleure activité de l’amylase dans la première partie. Au PH7, nous avons pris un échantillon avec une concentration d’enzyme amylase à différents PH. La plus petite concentration est à 50C dans la deuxième partie. La concentration est de 0,006.La couleur est plus claire comme la couleur de l’iode.L’amidon est utilisé avec l’amylase et donc la couleur du complexe est plus claire aussi.L’activité de l’enzyme amylase est la meilleure à 50C.Cette mesure est faite à 620nm.
DISCUSSION ET CONCLUSION
Pourquoi est mesurée à 620nm ? Pourquoi le HCI est utilisé pour la préparation ? Que signifie la couleur claire ? Comment plus de chaleur affecte-t-elle le rxn ? Pendant l’expérience, nous voulons distinguer le but de l’expérience en répondant à ces questions. Dans cette expérience, nous avons lié l’effet de différents tampons et de la température. Nous avons préparé des tampons à différents PH. KH2P04 a été préparé pour les PH 5, 6 et 7 et Na2HP04 pour 8 et 9. Dans la première partie, à température constante (température ambiante), l’échantillon avec la concentration d’amylase a été mesuré.Dans la première partie, à température constante (température ambiante), l’échantillon avec la concentration d’amylase a été mesuré. A PH 7, nous avons mesuré la plus petite concentration. Une petite concentration signifie moins de complexe, moins d’amidon et l’enzyme est utilisée, l’activité de l’enzyme est élevée. Notre résultat de la mesure à PH 7 est 0.026. Dans la deuxième partie, la température et le PH constants ont été changés et l’effet a été observé.A 50 C, on a trouvé la plus petite absorbance (0.0060) et la couleur était très claire, ce qui signifie qu’il y avait moins de complexe. Dans cette expérience, l’iode est utilisé pour détecter les molécules d’amidon en observant le changement de couleur. L’iode et l’amidon ont été combinés et ont formé un complexe. L’autre point est la raison pour laquelle le HCI est utilisé.L’acide arrête la réaction enzymatique et l’iode réagit avec l’amidon pour produire une couleur bleue.L’activité de l’enzyme est également essentielle.Elle peut être utilisée pour la détection de la dénaturation.L’amidon réagit avec l’iode qui est jaune pour former un composé bleu Amax=620nm.L’intensité de la couleur bleue peut être quantifiée par spectrophotométrie en mesurant son absorbance à 620nm.