L’ADNc est-il un simple ou un double brin ? – (Feb/09/2006 )

Bonjour,
J’ai posté ma question ailleurs mais n’ai pas eu de réponse, je voudrais la poster ici et, désolé que cela semble une question stupide, car je suis vraiment confus !
J’ai lu quelque part une chose qui m’a rendu perplexe à propos de l’ADNc. Je voudrais savoir si l’ADNc est un double brin ou un simple brin ?
Je sais que l’ADNc est la copie de l’ARNm par la transcriptase inverse donc, théoriquement, ce serait un simple brin , n’est-ce pas ou je me trompe ?
Merci pour vos commentaires

Pour la plupart des cas, comme pour la RT-PCR, le RACE 3′ ou 5′, nous utilisons simplement l’ADNc simple brin (l’ADNc premier brin), tandis que dans le cas de la préparation de l’ADNc pour la construction de bibliothèque, ou l’analyse RDA/SSH qui pourrait avoir besoin d’une étape supplémentaire de synthèse de second brin pour générer l’ADNc double brin.

hi
vous devez différencier 2 choses :
L’ADNc en général est la molécule d’ADN correspondant à peu près à la seuqence de l’ARNm. C’est donc une molécule double brin incluse dans un plasmide pour l’expression dans la plupart des cas.
RT PCR : la molécule d’ARNm est transcrite de manière inverse en ADNc simple brin. Après ce point, la RNase élimine la molécule d’ARNm et on obtient une molécule d’ADNc simple brin. Comme l’étape suivante est une PCR tout à fait classique, un simple brin est ok pour l’exp (et la première étape, qui correspond à la sysnthèse du second brin correspondant d’une molécule d’ADN restaure la vraie molécule d’ADNc.
Pour être juste, l’ADNc est une molécule double brin, mais par commodité, l’ADNc est aussi utilisé pour concevoir la molécule transcrite inverse de la RTPCR. Il devrait être nommé demi-ADNc ou ADNc simple brin.
L’ADNc est un nom abrégé.

alors que dans la plupart des cas, l’ADNc, abréviation d’ADN complémentaire, est défini comme une molécule d’ADN simple brin avec une séquence de nucléotides complémentaire d’une molécule d’ARN, et est synthétisé en laboratoire à partir d’ARNm par transcription inverse….

Donc, l’ADNc est simple brin jusqu’à ce qu’une réaction PCR soit effectuée ? Ok, dans ce cas, comment l’ADN polymérase Taq génère un second brin complémentaire à partir d’un seul ? Lorsque les deux amorces s’hybrident de chaque côté du même brin, comment peuvent-elles produire le second brin (le nouveau brin complémentaire) ?

Dans la PCR, une amorce se lie à un seul brin d’ADN (c’est pourquoi la première étape consiste toujours à denturer à 94C (ou environ) pour séparer toute molécule double brin en brins simples. Dans le cas de l’ADNc du premier brin provenant d’une réaction RT, une seule amorce se lie au premier tour… Cela signifie que le premier tour d’amplification dans une RT-PCR n’est pas logarithmique ; vous synthétisez simplement le deuxième brin d’ADNc. Dans les tours suivants (du tour 2 au tour n), il y a une amplification logrithmique parce que les amorces avant et arrière se lient toutes deux au modèle double brin dénaturé.
Au premier tour, je pense que c’est l’amorce avant qui se lie…. Je pense que c’est parce que ARNm=brin avant dans le génome et le premier brin ADNc=complément de l’ARNm (ou est le même que le brin inverse dans le génome)
Quelqu’un vérifie ma logique ici, je m’embrouille… est-ce que c’est bien que l’ARNm est le complément du brin inverse de l’ADN génomique ? ?
c’est à dire : séquence ARNm=brin avant=séquence 5′-3′ dans l’ADNg (juste avec U pas T)???
HTH

Merci pour tout, c’est plus clair pour moi maintenant.

Je pense que oui, jusqu’à ce qu’un intron soit rencontré, non ?
On peut vérifier n’importe laquelle de vos séquences d’ARNm connues dans le NCBI, récupérer le hit génomique et comparer les séquences pour voir si c’est vrai ou pas.

Oui c’est ça, il faudrait sauter les introns
Semble être une bonne façon de tester essayera plus tard si j’ai l’occasion et vous le fera savoir… plus j’y pense, séquence ARNm=séquence du brin avant doit être juste cependant…
Merci !