Une fixation, un traitement et une incorporation optimaux sont des premières étapes critiques pour permettre l’examen histologique de la morphologie des tissus et la localisation des biomarqueurs dans les échantillons de tissus. Le soin apporté à ces étapes initiales conduit à une coloration, une imagerie et une analyse moléculaire de meilleure qualité lors des phases ultérieures du flux de travail histologique. Cet article est un bref aperçu des schémas courants de fixation, de traitement et d’inclusion pour les tissus FFPE de rongeurs.
Fixation
Une fixation optimale des échantillons histologiques est essentielle pour la préservation de l’architecture tissulaire, y compris les cellules, les composants cellulaires (c’est-à-dire le cytoplasme, les noyaux, les organelles), le matériel extracellulaire et les composants moléculaires (c’est-à-dire les protéines, l’ADN, l’ARNm). Il existe de nombreux fixateurs différents, chacun ayant ses avantages et ses inconvénients selon l’application. Vous pouvez en savoir plus sur les différents fixateurs de tissus en utilisant la recherche Talk to Books de Google.
Le fixateur le plus couramment utilisé en pathologie diagnostique de routine est le formol tamponné neutre à 10% (NBF 10%). Ce fixateur permet généralement une bonne préservation des tissus ; cependant, des facteurs tels que le temps de fixation, la température, le pH et l’épaisseur de l’échantillon doivent être pris en compte afin d’obtenir les meilleurs résultats.
Spécimens : les tissus doivent être coupés à une épaisseur de 3 à 5 mm avant d’être placés dans le fixateur.
Volume : il faut utiliser au moins une partie de tissu pour 20 parties de fixateur. Le fixateur doit être exempt de sang.
Temps : les tissus sont généralement fixés pendant 24 heures à température ambiante avant d’être transformés en cire de paraffine.
Stockage : les tissus peuvent être stockés dans de l’éthanol à 70% après fixation. Ceci n’est pas recommandé pour le cerveau ou d’autres échantillons neurologiques.
Les tissus tels que les yeux, les poumons, les intestins et les os peuvent nécessiter des fixateurs différents et/ou un traitement spécial, veuillez contacter Reveal Biosciences pour plus d’informations.
Traitement des tissus
Les tissus fixés sont généralement transformés en cire de paraffine à l’aide de processeurs de tissus automatisés. Le traitement automatisé des tissus consiste à immerger les échantillons dans une série définie de solutions comprenant des alcools, du xylène et de la cire de paraffine. Chaque étape peut être personnalisée en contrôlant le temps, la température et la pression/vide (P/V) pour assurer une bonne pénétration de la solution dans les échantillons. Nos histologistes ont développé un certain nombre de programmes de traitement des tissus spécifiquement conçus pour différents types de tissus.
Enrobage
Un enrobage de haute qualité implique l’orientation cohérente de tous les échantillons du même type de tissu. Les échantillons peuvent être enrobés dans des blocs dans une variété d’orientations sur demande ; cependant, nous suivons généralement les directives du Registry of Industrial Toxicology Animal (RITA) et de la North American Control Animal Database (NACAD) pour l’enrobage des tissus de rongeurs. Veillez à préciser à l’avance si votre étude nécessite une orientation d’inclusion de tissus différente et nous serons heureux de répondre à votre demande.
En résumé, la fixation, le traitement et l’inclusion optimaux sont des premières étapes critiques pour permettre l’examen de la morphologie des tissus et la localisation des biomarqueurs dans les échantillons de tissus. Veuillez nous contacter pour toute question ou pour discuter de vos besoins d’étude et nous serons heureux de vous aider.