Qu’est-ce qu’un immuno-essai à flux latéral?
Les bandelettes de test à flux latéral basées sur les principes de l’immunochromatographie existent pour un large éventail d’analytes cibles. Les premiers tests ont été réalisés pour la détection de la gonadotrophine chorionique humaine (hCG). Aujourd’hui, des tests sont disponibles dans le commerce pour la surveillance de l’ovulation, la détection des maladies infectieuses, l’analyse des drogues illicites et la mesure d’autres analytes importants pour la physiologie humaine. Des produits ont également été introduits pour les tests, les applications agricoles, les tests environnementaux et les tests d’aliments &pour animaux.
Alors que les premiers tests présentaient des résultats qualitatifs basés sur la présence ou l’absence d’une ligne de signal, la conception des tests a progressé vers des dosages semi-quantitatifs et quantitatifs et l’intégration de lecteurs portatifs.
Un immunodosage à flux latéral est décrit en utilisant une terminologie variable selon les secteurs et les pays. Les noms communs incluent :
+ Essai immunologique à flux latéral (LFIA)
+ Test à flux latéral (LFT)
+ Dispositif à flux latéral (LFD)
+ Essai à flux latéral (LFA)
+ Essai immunochromatographique à flux latéral.
+ Bandelette
+ Test rapide
+ Bandelette de test
+ Test rapide
Les tests à flux latéral peuvent être développés pour être utilisés dans un format de bandelette ou dans une cassette. Les tests en dipstick et en cassette fonctionneront de manière similaire, cela dépend juste de l’industrie, de la matrice de l’échantillon et des exigences du marché, quant au format qui convient.
Format sandwich
Le format de test sandwich est généralement utilisé pour détecter des analytes relativement importants. Si l’analyte possède au moins deux sites de liaison distincts (c’est-à-dire des épitopes), il est possible de développer un essai « sandwich » dans lequel un anticorps dirigé contre un épitope est conjugué à la nanoparticule et un anticorps dirigé contre un autre épitope est immobilisé sur la ligne de test. Le format sandwich donne lieu à une intensité de signal qui est proportionnelle à la quantité d’analyte présente dans l’échantillon.
Format compétitif
Un format compétitif est utilisé pour détecter des analytes dans lesquels l’analyte est trop petit pour que deux anticorps se lient simultanément, comme les vitamines et les antibiotiques. Dans un test compétitif, la ligne de test contient la molécule d’analyte cible (généralement un complexe protéine-analyte). Les nanoparticules sont conjuguées à un anticorps qui reconnaît l’analyte. Si l’analyte n’est pas présent dans l’échantillon, les nanoparticules conjuguées à l’anticorps se lient à l’analyte au niveau de la ligne de test, ce qui entraîne une intensité de signal élevée. Si l’analyte cible est présent dans l’échantillon, l’analyte se lie aux anticorps à la surface de la nanoparticule et empêche la nanoparticule de se lier à la ligne de test. Cela réduira le signal au niveau de la ligne de test, résultant en une intensité de signal qui est inversement proportionnelle à la quantité d’analyte présente dans l’échantillon.
La technologie d’immunoessai à flux latéral utilise une membrane de nitrocellulose, des nanoparticules colorées (ou étiquettes), et généralement des anticorps, pour produire des résultats.
Lorsqu’un échantillon est ajouté, l’échantillon s’écoule le long du dispositif de test en passant par le tampon conjugué dans la membrane de nitrocellulose, puis sur le tampon absorbant.
La figure ci-dessous montre comment fonctionne un test sandwich :
Tampon d’échantillonnage : Joue le rôle de première étape du processus d’absorption et, dans certains cas, contient un filtre, pour assurer un flux précis et contrôlé de l’échantillon.
Tampon conjugué : Stocke les étiquettes et les anticorps conjugués, recevra l’échantillon. aide à la libération contrôlée du conjugué re-solubilisé sur la membrane de nitrocellulose.
Membrane de nitrocellulose : Fournit la phase solide idéale pour immobiliser les réactifs de la ligne de test et de contrôle. Lorsque l’échantillon se déplace le long du dispositif, les réactifs de liaison situés sur la membrane de nitrocellulose se lient à la cible au niveau de la ligne de test. Une ligne colorée va se former et la densité de la ligne va varier en fonction de la quantité de cible présente.
Tampon absorbant : Fournit un flux capillaire uniforme à travers la membrane, absorbe l’échantillon appliqué et empêche le reflux.
Matrices d’échantillons
L’analyte cible et les exigences du marché détermineront le type d’échantillon qui sera utilisé dans le test.
Certains échantillons nécessitent un tampon de fonctionnement pour faciliter la livraison de l’échantillon, par exemple les aliments pour animaux. D’autres échantillons tels que le sang, le sérum, l’urine ou la salive peuvent être placés directement sur un test, tandis qu’il y a des occasions où un tampon de dilution est nécessaire.
Les immunoessais à flux latéral sont développés pour détecter les analytes cibles dans les matrices d’échantillons, notamment :
1. Lait
2. sang total
3. sérum
4. salive
5. Urine
6. échantillons de tissus
7. aliments
8. boissons
9. Aliments pour animaux
10. Matériel végétal
11. Eau
Types d’étiquettes
Typiquement, les essais à flux latéral utilisent des nanoparticules d’or conjuguées dans le tampon conjugué. D’autres étiquettes comprennent des billes de polystyrène colorées, des billes magnétiques, des points quantiques ou des nanoparticules à conversion ascendante.
L’optimisation de l’essai permettra de s’assurer que l’étiquette interagit correctement avec l’anticorps et l’antigène pour garantir l’efficacité et la précision des résultats.
Essais à flux latéral multiplexé
Les essais sandwich et compétitifs peuvent être développés pour inclure une ou plusieurs lignes de test.
Un essai multiplexé peut être utilisé pour :
détecter plusieurs cibles dans un seul test plutôt que d’utiliser de nombreux tests individuels. Dans les situations où seul un petit volume d’échantillon est disponible, un test multiplexé vous permet de maximiser son utilisation ;
Aider au diagnostic lorsque la présence d’un certain nombre de marqueurs ensemble est requise ;
Confirmer la présence de plusieurs contaminants pendant les tests de gros volumes sur les aliments et les aliments pour animaux ;
offrir des avantages en termes d’économie de coûts aux utilisateurs finaux dans un laboratoire ou sur le terrain en testant différentes cibles simultanément ;
Zones éloignées ou agricoles où les ressources sont limitées et où le test multiplexé permettra de gagner du temps.
Dispositifs à flux latéral rapide quantitatif
Les premières versions des LFD étaient des tests essentiellement qualitatifs. Cependant, les améliorations apportées aux réactifs, aux matériaux constitutifs et aux technologies de lecture ainsi qu’aux procédés de fabrication signifient que des résultats quantitatifs sont réalisables.
En outre, les développements de la technologie des lecteurs et les progrès des matières premières, telles que les étiquettes, signifient qu’un test rapide à flux latéral peut égaler la sensibilité d’un test ELISA.
Avantages &Inconvénients des tests immunologiques à flux latéral
| Avantages | Inconvénients |
| Faible coût | Lecture qualitative ou semi-quantitative |
| Vaste gamme d’applications | La restriction du volume total de test peut imposer une limite à la sensibilité |
| Technologie bien établie, facilité de fabrication | Un volume d’échantillon inexact peut réduire la précision |
| Longue durée de conservation, pas besoin de réfrigération | La reproductibilité d’un test à l’autre peut être problématique |
| Simple, opération conviviale | Difficile de miniaturiser le volume d’échantillon |
| Sensibilité et spécificité élevées | Le multiplexage peut être difficile |
| Faible volume d’échantillon requis | Situation de brevet non claire dans certains cas |
| Test en une étape, pas d’étapes de lavage nécessaires, temps court pour le résultat | |
| Temps relativement court pour le développement, le temps de mise sur le marché est réduit | |
| Haut potentiel de commercialisation | |
| Facilement évolutif | |
| Peut être intégré aux systèmes de lecteurs | |
| Possibilité de multiplexage |
- Avantages :
Faible coût
Grande gamme d’applications
Technologie bien établie, facilité de fabrication
Longue durée de conservation, pas besoin de réfrigération
Fonctionnement simple et convivial
Haute sensibilité et spécificité
Faible volume d’échantillon requis
Test en une étape, pas d’étapes de lavage nécessaires, délai court pour le résultat
Délai de développement relativement court, le délai de mise sur le marché est réduit
Haut potentiel de commercialisation
Facilement évolutif
Peut être intégré aux systèmes de lecture
Possibilité de multiplexage - Inconvénients :
Lecture qualitative ou semi-quantitative
Restriction du volume total du test peut imposer une limite à la sensibilité
Un volume d’échantillon inexact peut réduire la précision
La reproductibilité d’un test à l’autre peut être problématique
Difficile de miniaturiser le volume de l’échantillon
Le multiplexage peut être difficile
Situation non claire du brevet dans certains cas
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