[4] A fokozott zöld fluoreszcens fehérje és destabilizált formájának összehasonlítása transzkripciós riporterként

Ez a fejezet a zöld fluoreszcens fehérje (GFP) mint riportergén hasznosságát mutatja be a génexpresszió vizsgálatában. A GFP in vivo és in vitro gerjesztésre fluoreszcens fényt bocsát ki, szubsztrát vagy kofaktor hozzáadása nélkül. A GFP fluoreszcens aktivitása fluoreszcens mikroszkóp, fluorométer, fluoreszcencia-aktivált sejtválogató (FACS) gép vagy képalkotó mikrolemez olvasó segítségével detektálható. Az Enhanced GFP (EGFP) egy fényesebb fluoreszcenciájú GFP mutáns, amely sokkal érzékenyebbé teszi a detektálást. A GFP riportergénként való használata számos előnnyel jár. Ezek közé tartozik a valós idejű elemzés, a minimális mintakezelés, a nagy mennyiségű elemzés lehetősége és a nagy érzékenység. A GFP azonban stabil fehérje, így a sejtekben kifejezve könnyen felhalmozódik. A felhalmozódás miatt a riporter indukálható expressziója érzéketlenné válik az indukció bármilyen változására, és így nehezen lenne használható kinetikai vizsgálatokban. Ez a fejezet az EGFP és a destabilizált EGFP (dEGFP) transzkripciós riporterként való hasznosságát tárgyalja az NF-KB-kötő szekvenciával és a timiklin-kináz (TK) promóterrel való fúziójukkal, valamint az EGFP és a dEGFP közötti expressziós különbség összehasonlításával. Megvitatja, hogy mind az EGFP, mind a dEGFP használható riporterként a transzkripciós vizsgálatokban. Emellett a dEGFP érzékenyebben reagál a tumor nekrózis faktor (TNF) kezelés változásaira a gyorsabb turnover sebessége miatt.

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.