VIRAL PLAQUE ASSAY

材料:

5x105cells/mlのSF9細胞の指数培養30ml

6ウェルプレート(各2)

1瓶 4% Agarose Gel

1瓶 SF-900 (1.)

SF-900(1.5ml)。3X) 培地

1 本

0.5ml バキュロウイルス上清

100ml SFM

1. 2.細胞をプレートの底に沈降させ、蓋をして1時間インキュベートします。 3.アガロースゲルのボトルを70℃のウォーターバスに入れます。 空瓶とSF-900(1.3X)を40℃の水槽に入れます。 4.常温で1時間培養後、倒立顕微鏡で単層を観察し、細胞の接着と50%コンフルエンスを確認します。 採取したウイルス上清を12mLディスポーザブルのSFM培地4.5mLに0.5mLずつ順次希釈し、8倍連続希釈液を作製する。 各ウイルスの上清を順次回収し、各ウイルスの希釈液を1mlずつ各ウエルに補充します。 8.アガロースが液状になったら、ボトルを水槽から滅菌フードに移します(20〜30分)。 空のボトルにSF-900 (1.3X) 培地を30ml、4%アガロースゲルを10ml分注し、軽く混和します。 プラッキングオーバーレイのボトルは、使用するまで40℃のウォーターバスに戻しておきます。 10.高希釈から低希釈へ順次、ウイルスを除去し、希釈したアガロース2mlに置き換えます。 真空ポンプに接続したパスツールピペットで簡単に接種痕を除去できます。

11. 10〜20分放置してゲルを硬化させてから移動します。

14.Monitorplates daily until the number of plaques counted in two consecutive days.

15.Determining the titer of the inoculum employed, optimal range to count 3 to20 plaques per well of a 6-well plate. 力価(pfu/ml)は次の式で算出することができる。 アガロースとナチュラルレッド色素を重層する。

0.5%アガロース溶液をSFMで調製する。

ナチュラルレッド溶液を最終濃度50mg/ml(3.33mg/mlストック1:66.6希釈)まで添加し、各ウェルに1mlをオーバーレイする(6ウェルプレートの場合)。

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