Optimale fixatie, verwerking en inbedding zijn kritische eerste stappen om histologisch onderzoek van weefselmorfologie en biomarkerlokalisatie in weefselmonsters mogelijk te maken. Zorgvuldigheid in deze eerste fasen leidt tot een hogere kwaliteit van kleuring, beeldvorming en moleculaire analyse in latere fasen van de histologische workflow. Dit artikel is een kort overzicht van gemeenschappelijke fixatie, verwerking, en inbedding schema’s voor FFPE knaagdier weefsel.
Fixatie
Optimale fixatie van histologische monsters is essentieel voor het behoud van weefsel architectuur met inbegrip van cellen, cellulaire componenten (dat wil zeggen, cytoplasma, kernen, organellen), extracellulaire materiaal, en moleculaire componenten (dat wil zeggen, eiwitten, DNA, mRNA). Er zijn veel verschillende fixatieven beschikbaar, en elk heeft zijn voor- en nadelen, afhankelijk van de toepassing. U kunt meer lezen over verschillende weefselfixatieven met behulp van Google’s Talk to Books search.
Het meest gebruikte fixatief in de routinediagnostische pathologie is 10% neutraal gebufferde formaline (10% NBF). Dit fixatief resulteert meestal in een goede weefselbehoud; echter, factoren zoals fixatie tijd, temperatuur, pH, en specimen dikte moet rekening worden gehouden om de beste resultaten te bereiken.
Specimens: weefsel moet worden bijgesneden tot een dikte van 3 – 5 mm voordat het in het fixeermiddel wordt geplaatst.
Volume: er moet ten minste één deel weefsel op 20 delen fixeermiddel worden gebruikt. Het fixeermiddel moet vrij zijn van bloed.
Tijd: weefsels worden gewoonlijk 24 uur bij kamertemperatuur gefixeerd voordat ze in paraffinewas worden verwerkt.
Opslag: weefsels kunnen na fixatie in 70% ethanol worden bewaard. Dit wordt niet aanbevolen voor hersenen of andere neurologische monsters.
Weefsels zoals ogen, longen, darmen en botten kunnen andere fixeermiddelen en/of een speciale verwerking vereisen; neem contact op met Reveal Biosciences voor meer informatie.
Weefselverwerking
Gefixeerde weefsels worden gewoonlijk tot paraffinewas verwerkt met behulp van geautomatiseerde weefselprocessoren. Geautomatiseerde weefselverwerking omvat het onderdompelen van monsters in een gedefinieerde reeks oplossingen, waaronder alcoholen, xyleen en paraffinewas. Elke stap kan worden aangepast door de tijd, temperatuur en druk/vacuüm (P/V) te regelen om een goede doordringing van de oplossing in de monsters te verzekeren. Onze histologen hebben een aantal weefselverwerkingsschema’s ontwikkeld die speciaal voor verschillende weefseltypes zijn ontworpen.
Embedding
Het inbedden van hoge kwaliteit impliceert de consistente oriëntatie van alle monsters van hetzelfde weefseltype. Op verzoek kunnen de monsters in blokken worden ingebed in verschillende richtingen; wij volgen echter gewoonlijk de richtlijnen van het Register voor dierlijke industriële toxicologie (RITA) en van de North American Control Animal Database (NACAD) voor het inblokken van knaagdierweefsel. Zorg ervoor dat u van tevoren aangeeft of uw studie een andere oriëntatie voor weefselinbedding vereist en wij zullen graag aan uw verzoek voldoen.
Samenvattend zijn optimale fixatie, verwerking en inbedding kritieke eerste stappen om het onderzoek van weefselmorfologie en biomarkerlokalisatie in weefselmonsters mogelijk te maken. Neem contact met ons op als u vragen hebt of als u uw onderzoeksbehoeften wilt bespreken. Wij helpen u graag verder.