Optymalne utrwalanie, przetwarzanie i osadzanie to krytyczne pierwsze kroki umożliwiające badanie histologiczne morfologii tkanek i lokalizację biomarkerów w próbkach tkanek. Staranność na tych początkowych etapach prowadzi do wyższej jakości barwienia, obrazowania i analizy molekularnej w późniejszych fazach pracy histologicznej. Niniejszy artykuł stanowi krótki przegląd powszechnie stosowanych schematów utrwalania, przetwarzania i osadzania tkanek gryzoni FFPE.
Utrwalanie
Optymalne utrwalanie próbek histologicznych jest niezbędne do zachowania architektury tkanki, w tym komórek, składników komórkowych (tj. cytoplazmy, jąder, organelli), materiału pozakomórkowego i składników molekularnych (tj. białek, DNA, mRNA). Istnieje wiele różnych dostępnych środków utrwalających, a każdy z nich ma swoje zalety i wady w zależności od zastosowania. Możesz przeczytać więcej o różnych utrwalaczach tkanek używając wyszukiwarki Google Talk to Books.
Najczęstszym utrwalaczem używanym w rutynowej patologii diagnostycznej jest 10% Neutralna Buforowana Formalina (10% NBF). Ten utrwalacz zazwyczaj zapewnia dobrą konserwację tkanki; jednakże, czynniki takie jak czas utrwalania, temperatura, pH i grubość próbki muszą być brane pod uwagę w celu osiągnięcia najlepszych wyników.
Odcinki: tkanka powinna być przycięta do grubości 3 – 5 mm przed umieszczeniem w utrwalaczu.
Objętość: należy stosować co najmniej jedną część tkanki na 20 części utrwalacza. Utrwalacz powinien być wolny od krwi.
Czas: tkanki są powszechnie utrwalane przez 24 godziny w temperaturze pokojowej przed przetworzeniem do parafiny.
Przechowywanie: tkanki mogą być przechowywane w 70% etanolu po utrwaleniu. Nie jest to zalecane w przypadku mózgu lub innych próbek neurologicznych.
Tkanki takie jak oczy, płuca, jelita i kości mogą wymagać innych utrwalaczy i/lub specjalnego przetwarzania, prosimy o kontakt z Reveal Biosciences w celu uzyskania dalszych informacji.
Przetwarzanie tkanek
Utrwalone tkanki są zazwyczaj przetwarzane na parafinę przy użyciu automatycznych procesorów tkanek. Zautomatyzowane przetwarzanie tkanek obejmuje zanurzanie próbek w określonej serii roztworów, w tym alkoholi, ksylenu i parafiny. Każdy etap może być dostosowany do indywidualnych potrzeb poprzez kontrolę czasu, temperatury i ciśnienia/próżni (P/V) w celu zapewnienia dobrej penetracji roztworu do próbek. Nasi histolodzy opracowali szereg schematów przetwarzania tkanek zaprojektowanych specjalnie dla różnych typów tkanek.
Zatapianie
Wysokiej jakości zatapianie obejmuje spójną orientację wszystkich próbek tego samego typu tkanki. Próbki mogą być osadzane w blokach w różnych orientacjach na życzenie, jednak zazwyczaj stosujemy się do wytycznych Registry of Industrial Toxicology Animal (RITA) i North American Control Animal Database (NACAD) dotyczących osadzania tkanek gryzoni. Proszę pamiętać o wcześniejszym określeniu, czy Państwa badanie wymaga innej orientacji osadzania tkanek, a my z przyjemnością spełnimy Państwa prośbę.
Podsumowując, optymalne utrwalanie, przetwarzanie i osadzanie są krytycznymi pierwszymi krokami umożliwiającymi badanie morfologii tkanek i lokalizację biomarkerów w próbkach tkanek. Prosimy o kontakt z nami w przypadku jakichkolwiek pytań lub w celu omówienia potrzeb badawczych, a my z przyjemnością pomożemy.