[4] Compararea proteinei fluorescente verzi îmbunătățite și a formei sale destabilizate ca reporteri de transcripție

Acest capitol descrie utilitatea proteinei fluorescente verzi (GFP) ca genă reporter în studiul expresiei genice. GFP emite lumină fluorescentă la excitare, fără adaos de substrat sau cofactor, atât in vivo cât și in vitro. Activitatea de fluorescență a GFP poate fi detectată cu ajutorul unui microscop cu fluorescență, al unui fluorometru, al unui aparat de sortare a celulelor activat prin fluorescență (FACS) sau al unui cititor de microplăci de imagistică. GFP îmbunătățită (EGFP) este un mutant GFP cu o fluorescență mai strălucitoare care face ca detecția să fie mult mai sensibilă. Utilizarea GFP ca genă reporter oferă o serie de avantaje. Printre acestea se numără analiza în timp real, manipularea minimă a probelor, posibilitatea de analiză a unor cantități mari de probe și sensibilitatea ridicată. Cu toate acestea, GFP este o proteină stabilă, astfel încât este ușor de acumulat atunci când este exprimată în celule. Acumularea face ca expresia inductibilă a reporterului să fie insensibilă la orice modificare a inducției și, prin urmare, ar fi dificil de utilizat în studiile de cinetică. Acest capitol discută utilitatea EGFP și a EGFP destabilizată (dEGFP) ca reporteri de transcripție prin fuzionarea acestora cu secvența de legare a NF-KB și cu promotorul timiclinei kinazei (TK) și prin compararea diferenței de expresie dintre EGFP și dEGFP. Se discută faptul că atât EGFP, cât și dEGFP pot fi utilizate ca reporteri în studiile de transcripție. De asemenea, dEGFP este mai sensibilă ca răspuns la modificările tratamentului cu factor de necroză tumorală (TNF) datorită ratei sale de reînnoire mai rapide.

.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.