Białko związane z receptorem lipoproteiny o niskiej gęstości (LRP), członek rodziny genów receptora lipoproteiny o niskiej gęstości, pośredniczy w komórkowym wychwycie różnorodnych ligandów. Składany chaperon, 39-kDa białko związane z receptorem (RAP), który rezyduje we wczesnych przedziałach szlaku wydzielniczego, hamuje wiązanie wszystkich ligandów do receptora i może służyć do zapobiegania przedwczesnemu wiązaniu ligandów z receptorem podczas traffikacji do powierzchni komórki. Aby wyjaśnić interakcje molekularne, które leżą u podstaw wzajemnego oddziaływania między receptorem, RAP i ligandami, przeanalizowaliśmy i określiliśmy miejsca wiązania inhibitora aktywatora plazminogenu-1 (PAI-1), kompleksów tkankowego aktywatora plazminogenu (t-PA).PAI-1, RAP i fragmentu Fab A8 anty-LRP. W tym celu wygenerowaliśmy serię rozpuszczalnych rekombinowanych fragmentów obejmujących drugi klaster powtórzeń typu dopełniacza (C3-C10) i amino-końcowy, flankujący naskórkowy czynnik wzrostu (E4) LRP (E4-C10; aminokwasy 787-1165). Wszystkie fragmenty uległy ekspresji w komórkach nerki chomika i zostały oczyszczone metodą chromatografii powinowactwa. Szczegółowe badania wiązania ligandów do fragmentów przy użyciu powierzchniowego rezonansu plazmonowego wykazały obecność trzech odrębnych, zależnych od Ca2+ miejsc wiązania ligandów w domenie Cl-II (cluster II) LRP. Kompleksy t-PA.PAI-1, jak również PAI-1 wiążą się do domeny zlokalizowanej w aminokońcowej części Cl-II, obejmującej powtórzenia E4-C3-C7. Przylegające do tego miejsca i częściowo nakładające się na nie miejsce wiążące RAP o wysokim powinowactwie znajduje się na powtórzeniach C5-C7. Fab A8, pseudo-ligand receptora, wi±że się z trzecim, zależnym od Ca2+ miejscem wi±ż±cym na powtórzeniach C8-C10 na karboksylo-końcowym końcu Cl-II. Następnie zbadano hamowanie przez RAP wiązania ligandu do LRP i do Cl-II. Zgodnie z oczekiwaniami, zaobserwowano silne hamowanie wiązania kompleksów t-PA.PAI-1 i Fab A8 do LRP przez RAP (IC50 zgodne z 0,3 nM), podczas gdy w odwrotnym eksperymencie konkurencja kompleksów t-PA. PAI-1 i Fab A8 o wiązanie RAP do LRP można było wykazać tylko przy wysokich stężeniach konkurentów (>/=1 mikroM). Co ciekawe, mimo że równowagowe stałe dysocjacji dla wiązania RAP do LRP i do Cl-II są podobne, wiązanie ligandów do Cl-II jest uniemożliwiane przez RAP tylko w stężeniach, które są co najmniej o 2 rzędy wielkości wyższe niż te wymagane do zahamowania wiązania ligandu do LRP. Nasze wyniki sprzyjają modelom, które proponują indukowane przez RAP allosteryczne hamowanie wiązania ligandu do LRP, które może wymagać cząsteczek LRP, które są zlokalizowane poza Cl-II receptora.